流式細(xì)胞術(shù)（Flow Cytometry，F(xiàn)CM）是一種對(duì)液流中排成單列的細(xì)胞或其它生物微粒（如微球，細(xì)菌，小型模式生物等）逐個(gè)進(jìn)行快速定量分析和分選的技術(shù)。

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一、為什么要用同型對(duì)照？

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同型對(duì)照是使用與一抗相同種屬來(lái)源、相同亞型、相同劑量和相同的免疫球蛋白及亞型的免疫球蛋白，用于消除由于抗體非特異性與細(xì)胞結(jié)合而產(chǎn)生的背景染色。同型對(duì)照是真正意思上的陰性對(duì)照，它不但可以用來(lái)設(shè)定流式細(xì)胞儀的電壓，而且還可以幫忙省去昂貴與繁瑣的重組細(xì)胞因子競(jìng)爭(zhēng)封閉步驟。

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二、如何選擇同型對(duì)照？

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分析流式結(jié)果時(shí)，不能因?yàn)榈玫搅藷晒庑盘?hào)就判斷細(xì)胞表面肯定結(jié)合有相應(yīng)的熒光素，從而得出細(xì)胞表達(dá)相應(yīng)的抗原分子的結(jié)論，而應(yīng)該比較該熒光信號(hào)與細(xì)胞的非特異性熒光，如果得到的熒光信號(hào)大于非特異性熒光，說(shuō)明得到的熒光信號(hào)部分來(lái)源于熒光素的特異性熒光，就可以得出細(xì)胞表達(dá)相應(yīng)的抗原分子的結(jié)論。

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所以，確定與熒光素?zé)o關(guān)的細(xì)胞自身的非特異性類光的強(qiáng)弱非常重要，而設(shè)立陰性對(duì)照就是為了確定細(xì)胞的非特異性熒光。

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看看以下3類艾美捷整理的陰性對(duì)照流式分析比較全面的陰性對(duì)照：

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第1類“negative”表示的是不加任何熒光素偶聯(lián)抗體時(shí)得到的熒光信號(hào)，因?yàn)闆](méi)有標(biāo)記任何類光素，所以這組得到的熒光信號(hào)與熒光素?zé)o關(guān)，與細(xì)胞抗原分子CD69是否表達(dá)無(wú)關(guān)，得到的熒光信號(hào)代表的是非特異性熒光信號(hào)；

第2類“抗CD69”表示的是用抗CD69抗體標(biāo)記樣品細(xì)胞后得到的類光信號(hào)，雖然抗CD69抗體能修與細(xì)胞表面的CD69抗原分子結(jié)合，但是抗CD9抗體沒(méi)有偶聯(lián)熒光素，所以得到的熒光信號(hào)也與細(xì)胞表面是否表達(dá)有CD69分子無(wú)關(guān)，得到的熒光信號(hào)代表的也只是細(xì)胞本身的非特異性熒光信號(hào)，這種對(duì)照用于排除抗體的干擾；

第3類“IgG1-PE”表示的是標(biāo)記與抗CD69抗體同種屬（來(lái)源于同一物種）且同類（抗CD69-PE中的抗體IgG1類的）的非特異性抗體（IgG1）與PE熒光素偶聯(lián)的同型（isotype）對(duì)照抗體（IgG1-PE）后，得到的熒光信號(hào)，這種就屬于同型對(duì)照，其不能與細(xì)胞表面的CD69發(fā)生特異性結(jié)合，所以細(xì)胞表面不會(huì)結(jié)合有IgG1-PE，zui后得到的熒光信號(hào)是代表細(xì)胞本身的非特異性熒光，不屬于PE熒光素產(chǎn)生的特異性熒光信號(hào)，這種同型對(duì)照用于排除熒光素的干擾。

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以上3種陰性對(duì)照，并不用全部設(shè)置齊全，一般只需要設(shè)置1種陰性對(duì)照就可以，其中第3種同型對(duì)照是zui常規(guī)的陰性對(duì)照設(shè)置法。

?以下熒光標(biāo)記同型對(duì)照抗體案例展示：

使用小鼠IgG3同種型對(duì)照（PPV-07）DyLight?650抗體（樣品中濃度為5ug/ ml）對(duì)人外周血進(jìn)行的流式細(xì)胞儀表面非特異性染色模式。

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更多類型熒光標(biāo)記的同型對(duì)照抗體：

https://www.amyjet.com/featured/flow-cytometry.shtml