HQO誘導(dǎo)自噬、細(xì)胞染色和共聚焦成像：適當(dāng)條件誘導(dǎo)自噬（如無血清培養(yǎng)基、PBS或者細(xì)胞自噬激活劑處理等），HQO（10 μM）加入無血清培養(yǎng)基中，37℃孵育10 min，PBS洗滌1-3次，共聚焦成像。559 nm激發(fā)，570-610 nm發(fā)射波長(zhǎng)為示蹤正常線粒體的熒光；635 nm激發(fā)，650-730 nm發(fā)射波長(zhǎng)為示蹤自噬溶酶體的熒光。

圖1.HQO化學(xué)結(jié)構(gòu)

HQO熒光原理：HQO需與其它探針分子組合使用，進(jìn)入活細(xì)胞后選擇性富集于線粒體；當(dāng)線粒體發(fā)生自噬形成自噬溶酶體后其微環(huán)境pH下降，使HQO質(zhì)子化；質(zhì)子化后HQO的熒光激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)均發(fā)生紅移（斯托克斯位移大于100 nm）。由于微環(huán)境pH值的不同，使得HQO在線粒體和自噬溶酶體中呈現(xiàn)不同顏色熒光（圖2），因而可以很好地區(qū)分正常線粒體和包被損傷線粒體的自噬溶酶體。

圖2.HQO熒光原理

HQO基礎(chǔ)信息

中文名：線粒體自噬熒光探針HQO；線粒體自噬探針；2,6-雙（2-（3,3-二甲基-1-丙基 - 二氫吲哚-2-亞基）亞乙基） - 環(huán)己酮；

英文名：HQO；Mitochondrial Autophagy Fluorescent Probe；2,6-bis(2-(3,3-dimethyl-1-propylindolin-2-ylidene)ethylidene)cyclohexan-1-one?

CAS號(hào)：1442645-34-2

結(jié)構(gòu)式：CCCN1C2=CC=CC=C2C(C1=CC=C3CCCC(=CC=C4C(C5=CC=CC=C5N4CCC)(C)C)C3=O)(C)C

分子式：C36H44N2O

分子量：520.75

性狀：紅色至深紅色至紅棕色結(jié)晶粉末

儲(chǔ)藏條件：-20°C儲(chǔ)存，-80°C儲(chǔ)存時(shí)間更長(zhǎng)（1-2年）

使用案例

圖3.HQO監(jiān)測(cè)饑餓條件下細(xì)胞發(fā)生線粒體自噬過程