熒光標(biāo)記多肽FITC/AMC/FAM/Rhodamine/TAMRA/Cy3/Cy5/Cy7-Peptide
熒光染料及其熒光標(biāo)記技術(shù)一直是生物領(lǐng)域常用的產(chǎn)品和技術(shù)，我們公司擁有的標(biāo)記熒光的波長從300nm到700nm，公司除了常見的FITC、FAM、羅丹明、AFC、AMC、Rox、Sulforhodamine 101、5-TAMRA、EDANS Texas Red、5-Tamra、5-lodoacetamido fluorescein等熒光標(biāo)記染料外，還研究Cy3，Cy5, BODIPY各種衍生物等特色產(chǎn)品。公司用NHS活化的熒光染料可以用于蛋白、多肽、DNA、抗體等標(biāo)記。
一、什么是熒光標(biāo)記？
熒光標(biāo)記所依賴的化合物稱為熒光物質(zhì)。熒光物質(zhì)是指具有共軛雙鍵體系化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物，受到紫外光或藍紫光照射時，可激發(fā)成為激發(fā)態(tài)，當(dāng)從激發(fā)態(tài)恢復(fù)基態(tài)時，發(fā)出熒光。熒光標(biāo)記技術(shù)指利用熒光物質(zhì)共價結(jié)合或物理吸附在所要研究分子的某個基團上，利用它的熒光特性來提供被研究對象的信息。熒光標(biāo)記的無放射物污染，操作簡便等優(yōu)點，使得熒光標(biāo)記物在許多研究領(lǐng)域的應(yīng)用日趨廣泛。
二、熒光標(biāo)記的作用
熒光標(biāo)記物質(zhì)在蛋白的功能研究、藥物篩選等領(lǐng)域也有著廣泛的應(yīng)用。人們利用利用熒光標(biāo)記的多肽來檢測目標(biāo)蛋白的活性，并將其發(fā)展的高通量活性篩選方法應(yīng)用于疾病治療靶點蛋白的藥物篩選和藥物開發(fā)（例如，各種激酶、磷酸酶、肽酶等）。因此，多肽的熒光修飾，同樣是多肽合成領(lǐng)域的重要內(nèi)容。
三、熒光標(biāo)記的位點
熒光標(biāo)記物質(zhì)可以直接和多肽的N端直接相連（如異硫氰酸熒光素的連接， 通常在多肽的N端和異硫氰酸熒光素直接插一個氨基乙酸或者β-丙氨酸。），或者在C端和賴氨酸（或半胱氨酸）的側(cè)鏈連接、或者在其它可以連接的位子連接。
四、熒光標(biāo)記的舉例
4.1 熒光標(biāo)記FITC修飾
異硫氰酸熒光素（FITC）具有比較高的活性，通常來說，在固相合成過程中引入該種熒光基團相對于其他熒光素要更容易，并且反應(yīng)過程中不需要加入活化試劑。
熒光標(biāo)記FITC修飾的多肽通常主要有兩種形式：
（1）在整條肽鏈N端接入FITC，并且在FITC之前接入一分子的Acp（6-氨基己酸），也稱烷基間隔器。反應(yīng)中FITC與肽鏈上裸露的-NH2反應(yīng)，Acp的接入提供了六個碳的直鏈空間，大大降低了反應(yīng)的空間位阻，提高了反應(yīng)效率，降低了反應(yīng)難度。其次，F(xiàn)ITC還與多肽結(jié)構(gòu)中的-SH，側(cè)鏈-NH2反應(yīng)，Acp的加入也降低了這種副反應(yīng)發(fā)生的可能。此外，多肽在酸性環(huán)境條件下切割時，在N端接入FITC的多肽需要經(jīng)歷環(huán)化作用來形成熒光素，這種過程通常都會伴隨zui后一個氨基酸的切除，而烷基間隔器Acp的接入就避免了這一情況的發(fā)生。
（2）在整條肽中的某個Lys側(cè)鏈接入FITC，Lys側(cè)鏈為末端為-NH2的四碳直鏈烷基，直接起到了降低空間位阻的作用。這種修飾方式能夠靈活的在整條肽中任何位置進行FITC修飾，而不僅僅局限于末端。
4.2 熒光標(biāo)記AMC修飾
? ? ? 7-氨基-4-甲基香豆素（AMC）是一種應(yīng)用廣泛的熒光標(biāo)記試劑，例如，酶的痕量測定，酶的鑒定，激光染料的制備等多種用途，此外，C端用香豆素修飾的泛素分子也是研究蛋白質(zhì)泛素化過程的重要探針。
? ? 與其他熒光染料不同的是，AMC修飾多肽分子是從C端進行：
AMC與肽鏈C端第一個氨基酸反應(yīng);
固相合成整條肽鏈（從第二個氨基酸開始），并且保留整條肽鏈的側(cè)鏈保護基和zui后一個氨基保護基；
液相縮合AA-AMC與全保護的肽鏈；
（4）切除保護基，完成肽鏈的修飾。
4.3 熒光標(biāo)記5-FAM修飾
通常用于激光共聚焦顯微鏡和流式細胞技術(shù)的運用。
羅丹明B是眾多羅丹明染料中的一種，用于熒光測定。
4.5 熒光標(biāo)記5-TAMRA 修飾
5-TAMRA是用于標(biāo)記肽和蛋白質(zhì)的最流行的橙色熒光團之一。
4.6 熒光標(biāo)記Cy 3和 Cy 5修飾
Cy3 and Cy5 是高消光系數(shù)的染料。因此，它們特別適用于細胞內(nèi)敏感的多肽定位實驗。它們的缺點是在多肽合成的環(huán)境中非常的不穩(wěn)定，因此合成的量相對低。
Cy3-Peptide
