作者︱王琳

來(lái)源︱Bio-protocol第三屆生物實(shí)驗(yàn)短視頻大賽

ImageJ是一個(gè)用Java語(yǔ)言開發(fā)的圖像處理和分析平臺(tái)，能夠?qū)Χ喾N圖像進(jìn)行處理和分析的免費(fèi)軟件。ImageJ在生物學(xué)研究當(dāng)中應(yīng)用十分廣泛，可以用于細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞分析、形態(tài)測(cè)量等。GraphPad Prism是一個(gè)能夠?qū)?shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析并進(jìn)行繪圖的常用軟件。

在生物學(xué)研究當(dāng)中，我們經(jīng)常通過western blot實(shí)驗(yàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的蛋白表達(dá)水平進(jìn)行比較，首先需要一個(gè)內(nèi)參作為對(duì)照，將其調(diào)整到同一水平，即均一化，然后再對(duì)需要比較的蛋白的表達(dá)水平進(jìn)行比較。

我們可以通過軟件ImageJ測(cè)量western blot條帶的灰度值，通過將內(nèi)參均一化，來(lái)比較實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比蛋白濃度的變化，并通過Prism將數(shù)據(jù)量化作圖展示出來(lái)。

一、實(shí)驗(yàn)樣品與儀器軟件

1. 樣品信息

實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的Western blot條帶圖（內(nèi)參和目的蛋白）

2. 儀器和軟件

ImageJ，GraphPad Prism

二、實(shí)驗(yàn)操作

在ImageJ中通過 File→Open 分別打開內(nèi)參和目的蛋白的western blot圖，然后將膠圖通過Image→Type→8-bit將圖片轉(zhuǎn)為8位的灰度圖，用矩形選框工具（工具欄第一個(gè)）框選同一行的所有條帶,按Ctrl+1，緊接著按Ctrl+3，得到峰形圖,用直線工具，將所有小峰圖封閉起來(lái),選擇魔法棒工具，依次點(diǎn)擊封閉后的各個(gè)小峰，即可得到灰度值。然后將內(nèi)參的灰度值均一化，去比較目的蛋白的灰度值，并用Prism量化。

三、注意事項(xiàng)

Western blot的圖片盡可能的條帶清晰，背景較淺，這樣測(cè)出來(lái)的灰度值會(huì)更準(zhǔn)確。

四、作者與課題組簡(jiǎn)介

作者簡(jiǎn)介

王琳，中國(guó)科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所博士生在讀，主要研究方向?yàn)槿旧|(zhì)的表觀遺傳調(diào)控在染色質(zhì)復(fù)制過程中的功能以及小米抗旱抗鹽位點(diǎn)的篩選及功能研究。

課題組簡(jiǎn)介

導(dǎo)師：姜丹華，博士，研究員，博士生導(dǎo)師

研究方向：植物染色質(zhì)調(diào)控；作物耐逆的分子遺傳機(jī)理。

實(shí)驗(yàn)室主要研究植物染色質(zhì)調(diào)控以及植物適應(yīng)環(huán)境，耐逆的分子遺傳機(jī)理。

Bio-protocol 簡(jiǎn)介? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?

Bio-protocol于2011年在斯坦福大學(xué)創(chuàng)建, 致力于搭建全球權(quán)威的、高質(zhì)量的生物實(shí)驗(yàn)方案分享平臺(tái)，以助力科學(xué)發(fā)現(xiàn)。Bio-protocol期刊是Bio-protocol旗下的一份同行評(píng)審的國(guó)際學(xué)術(shù)期刊，發(fā)表高質(zhì)量的生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)方案，旨在提高科研的可重復(fù)性。至今，Bio-protocol已發(fā)表了來(lái)自全球上萬(wàn)名優(yōu)秀科研工作者（包括多名諾貝爾獎(jiǎng)獲得者）的4000多篇實(shí)驗(yàn)方案，并且同 Science、eLife等12家國(guó)際權(quán)威科學(xué)雜志建立長(zhǎng)期合作關(guān)系，共同促進(jìn)生命科學(xué)研究的可重復(fù)性。2019年Bio-protocol期刊已被PubMed Central，ESCI收錄。

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