激光共聚焦顯微鏡學(xué)習(xí)LSM800的使用 3-2






然后切換到第二個界面acquisition,嗯,首先從第一行第一列的第一行開始,我們可以通過smart setup進行熒光染料的設(shè)置,點擊smart set up。然后會出來一個對話框,然后通過點擊加號進行添加熒光通道啊,我的一個是在在recent里有好,雙擊添加也可以,或者是選中通道,點擊右下方的ad也可以,好另外還有一個是CY3,那在recent里面沒有,那我可以在測試里面輸入CY,然后找一下CY3,點擊選中,然后添加at,就是右下角有個close或者上方的叉,關(guān)掉這個對話框,然后你如果覺得這個他給你設(shè)置的熒光是淺藍色,不是那么顯眼,你可以點擊右方的小三角,然后把它啊換成blue啊,同樣的第二個如果他給你是橙黃色。你覺得不是那么明顯,那你可以把它變成。Right,然后呢,選擇best signal,點擊OK,這時候呢,我通過smart set up設(shè)置出來兩個熒光通道,一個是depi,一個是CY3好,下面一行按鈕呢,主要用到的是第三個live預(yù)覽以及第五個snap拍照,下面是高級功能,等大家用到的時候可以嗯,找我一下啊,我再教一下大家,然后下面呢,就是我們剛剛設(shè)置出來熒光通道啊一二,然后呢,這個最下方有一個esid呢,這個是明場,如果你拍的是細胞,可以把它勾選上啊,這時候你對應(yīng)的熒光通道下方就會出來一個名場,那我現(xiàn)在是組織,我就不需要這個,那就不需要勾選它,好第二列。上方第一行顯示的是我選擇的物徑,然后呢,大概看一眼frame size1024乘以1024,如果不對呢,選擇S乘以Y,然后自動自己再手動選擇一下也可以啊,然后呢,Speed是七二,Number呢選擇二或四都可以啊,一般我們默認的就是選擇二,就圖像質(zhì)量就可以,如果你有嗯,圖像數(shù)據(jù)不是特別理想,或者是又是發(fā)文章的重要數(shù)據(jù)的時候,你可以選擇四,這時圖像質(zhì)量會更好一點。然后呢,在下一行是我們的scan area是我們的掃描的區(qū)域,這個框框?qū)?yīng)的就是我掃描區(qū)域的大小,視野范圍的大小,默認呢是1.0,那它最最大呢可以放到0.5,你可以根據(jù)自己的需要進行選擇,那我現(xiàn)在reet啊,恢復(fù)到默認值,然后下面一行就是我這應(yīng)的我剛剛設(shè)置的兩個通道。JP和CY3,嗯,然后在下面一行呢,對應(yīng)的是我們所需要用到的這它們對應(yīng)的激激發(fā)光,然后CY3呢是561栽P呢是405激發(fā)的,以及他們對應(yīng)的熒光的電壓值啊,然后呢,Master gain值啊,嗯,這個值呢,Master更值,一定要注意不要超過800啊,它會它會讓你的太高的話,會讓你的噪點會比較大,因為我剛剛是用目鏡找膠的啊,所以我現(xiàn)在選中dePi通道,然后點擊那按鈕。然后這時候就出來一個圖像,出來的是什么?出來的是我的細胞核組織當(dāng)中的細胞核的圖像,我可以通過調(diào)焦,然后。將它調(diào)整到一個比較好的狀態(tài)。啊,可能是這個狀態(tài)吧,我一會再看一眼CY3的通道,如果覺得稍微有點暗,你可以增加這個master電值啊,但是注意不要超過800,然后如果覺得還可以增加什么呢?還可以增加這個電壓值百分之多少,默認是0.2%,但它跟上一個用戶關(guān)閉軟件的時候的程序也有一定關(guān)系哦,現(xiàn)在是1.41.5,當(dāng)然這時候其實已經(jīng)曝光過了,那我可以稍微適當(dāng)降一下啊。這個值好,我可以點擊點擊stop,點成stop之后呢,切換到第二個通道CY3,選中它,然后繼續(xù)點擊來,我看一下在這個通道下,我的熒光會怎么樣明顯呢,在這個數(shù)值。下我的熒光,CY3的熒光呢,是偏弱一點的,那我可以適當(dāng)?shù)陌堰@個值增加一下,現(xiàn)在呢,它是0.2%和750,那我首先選擇把這個電壓值稍微加一下,好這時候我的出來細節(jié)了,我的熒光的細節(jié)出來了啊。好,這時候我可以針對它來進行微微調(diào)一下焦,調(diào)到一個比較適合展示我細胞形態(tài)的一個狀態(tài),然后呢,也可以通過。撥動這個操作桿。調(diào)整到我所關(guān)心的區(qū)域,這個呢就是操縱桿,然后你輕輕的前后左右都可以移動。將我的樣本調(diào)整到比較合適的區(qū)域呢,我同樣的是把這個level呢,點擊stop之后,我就可以點擊snap。進行拍照,首先出來的是一個紅色的我的CY3的圖像,然后緊接著出來一個藍色的細胞核的圖像,在2D狀態(tài)下呢,你看到的是一個墨紙的圖,然后你點擊speed,看到的是紅色,藍色以及墨紙的圖,一共是三張,但無論怎么樣,你保存的圖像里面,文件里這三張都是有的,然后你可以在這兒點擊。Save保存到你要的文件夾里啊,然后我們這個呢,是放在D盤data文件夾里啊,然后你可以建一個你的導(dǎo)師的名字,然后建立一個今天的日期,然后建立這個組,比如說他是K組吧。好,我所有的這個組的樣品都保存在這個文件夾里,點擊右下角的對保存,如果說這個樣品當(dāng)中時候,我對這個和這個細胞比較感興趣,想把它倆放在一起放大一下,看一下效果啊。