BT-474細(xì)胞是人類乳腺癌細(xì)胞株，來(lái)源于一名乳腺癌患者的腫瘤組織。該細(xì)胞株最初于1975年由美國(guó)國(guó)立癌癥研究所（NCI）的Brugge等人分離和培養(yǎng)，屬于一種激素受體陽(yáng)性的HER2過(guò)表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞株。

種屬 ：人

性別/年齡 ：女/60歲

組織 :乳腺；乳房/導(dǎo)管

疾病:導(dǎo)管癌

培養(yǎng)條件:95%空氣，5%二氧化碳；37℃

BT-474細(xì)胞培養(yǎng)4倍成像

BT-474細(xì)胞培養(yǎng)方法

1.細(xì)胞的準(zhǔn)備與分離

首先，在開(kāi)始培養(yǎng)BT-474細(xì)胞之前，需要準(zhǔn)備足夠數(shù)量的種子細(xì)胞。可以從細(xì)胞庫(kù)中購(gòu)買現(xiàn)成的BT-474細(xì)胞，或者用其他細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)來(lái)培養(yǎng)和分離出BT-474細(xì)胞。

對(duì)于BT-474細(xì)胞的分離，最常見(jiàn)的方法是通過(guò)酶消化來(lái)將細(xì)胞從培養(yǎng)皿上分離出來(lái)。建議使用0.25％胰酶和0.02％EDTA來(lái)消化細(xì)胞，約需消化15-30分鐘。處理完后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到適當(dāng)培養(yǎng)皿中。

2.培養(yǎng)基與溫度

接下來(lái)，將準(zhǔn)備好的分離細(xì)胞加入到含有經(jīng)過(guò)滅菌處理的培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中。我們推薦使用DMEM/F12培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)BT-474細(xì)胞。此外，還可以添加FBS（胎牛血清）或其他適當(dāng)?shù)奶砑觿ㄈ缁|(zhì)粘附因子，細(xì)胞因子等）來(lái)增強(qiáng)BT-474細(xì)胞的生長(zhǎng)。

為了保持BT-474細(xì)胞的健康和快速增殖，可以將細(xì)胞培養(yǎng)在恒定的37℃和5％CO2的條件下。使用恒溫箱或培養(yǎng)箱來(lái)保持培養(yǎng)皿內(nèi)恒定的溫度和氣氛環(huán)境。

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3.傳代

當(dāng)BT-474細(xì)胞培養(yǎng)達(dá)到80％-90％的密度時(shí)，即表現(xiàn)出較高的細(xì)胞增殖速率時(shí)，需要進(jìn)行傳代。傳代操作旨在拆解成熟的細(xì)胞集合并將其重新分離，從而實(shí)現(xiàn)種子細(xì)胞的擴(kuò)張。

對(duì)于BT-474細(xì)胞的傳代，可以使用同樣的酶消化方法，將細(xì)胞從培養(yǎng)皿上分離出來(lái)，再種植到新的培養(yǎng)皿中，并添加新的培養(yǎng)基。傳代次數(shù)應(yīng)注意控制，過(guò)多次傳代會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)特性發(fā)生變化，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

4.微鏡下的觀察

細(xì)胞的形態(tài)是細(xì)胞生物學(xué)研究中的重要指標(biāo)之一。為了確保BT-474細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中的健康狀態(tài)，建議每天進(jìn)行顯微鏡下的觀察，注意觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)和細(xì)胞形態(tài)變化。

BT-474細(xì)胞培養(yǎng)顯微鏡下20倍成像

5.注意事項(xiàng)

1. 細(xì)胞培養(yǎng)條件要控制好，保持適當(dāng)?shù)腃O2濃度和溫度，避免細(xì)胞過(guò)度密集。

2. 細(xì)胞傳代次數(shù)不宜過(guò)多，一般傳代3-4次即可。

3. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要注意無(wú)菌操作，避免細(xì)胞污染和交叉感染。