DNFB和Edman是兩種不同的蛋白質(zhì)N末端序列分析方法，其原理不相同但是非常類似，都是利用化合物與蛋白質(zhì)的末端氨基酸進(jìn)行反應(yīng)生成氨基酸-化合物復(fù)合體，再對(duì)該產(chǎn)物進(jìn)行鑒定從而實(shí)現(xiàn)N末端氨基酸序列的分析，只是兩者利用的化合物以及反應(yīng)的原理不同。下面對(duì)兩種方法的原理進(jìn)行簡(jiǎn)單介紹。?

DNFB即2, 4-二硝基氟苯，在弱堿性環(huán)境（pH=8.0~9.0）下可以與蛋白質(zhì)N末端的α氨基酸結(jié)合生成穩(wěn)定的2, 4-二硝基苯氨基酸（DNP-氨基酸），DNP-氨基酸易溶于有機(jī)溶劑如乙醚和乙酸乙酯等，用有機(jī)溶劑提取DNP-氨基酸，再通過(guò)紙層析法或色譜法對(duì)其進(jìn)行鑒定。?

Edman降解法通過(guò)循環(huán)3個(gè)化學(xué)反應(yīng)實(shí)現(xiàn)N末端氨基酸的序列測(cè)定。其基本原理是利用異硫氰酸苯酯（PITC）特異性識(shí)別并連接在待測(cè)蛋白質(zhì)的N端氨基酸上形成PITC-蛋白復(fù)合物；在酸處理?xiàng)l件下，PITC連接的N端氨基酸被切割，形成不穩(wěn)定的PITC-氨基酸復(fù)合物；被萃取的PITC-氨基酸復(fù)合物在酸性條件下轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定的苯基乙內(nèi)酰硫脲（PTH）衍生物；最后利用高效液相色譜HPLC鑒定氨基酸種類。每次Edman 反應(yīng)只斷裂一個(gè)氨基酸，將少了一個(gè)氨基酸的多肽鏈進(jìn)行回收并重復(fù)以上操作，直到最后鑒定出N末端的氨基酸排列順序。?

百泰派克公司采用島津公司Edman測(cè)序系統(tǒng)，為廣大科研工作者和科研客戶提供基于Edman的N端測(cè)序服務(wù)技術(shù)包裹，可對(duì)純化后蛋白產(chǎn)物、抗體以及蛋白疫苗的N末端氨基酸序列進(jìn)行準(zhǔn)確測(cè)定。此外，百泰派克生物科技也建立了以先進(jìn)的LC-MS/MS技術(shù)進(jìn)行N-端測(cè)序的平臺(tái)，可以測(cè)出封閉和修飾的蛋白質(zhì)末端，與Edman降解法形成互補(bǔ)，保證N端測(cè)序服務(wù)的順利進(jìn)行。?