經(jīng)典染料香豆素，用途zui廣泛的香豆素包括AMCA，7-氨基香豆素（AFC和AMC），7-羥基香豆素和7-甲氧基香豆素的衍生物， 用于制備藍(lán)色熒光肽，蛋白質(zhì)和其他生物分子。與熒光素，羅丹明和花青素相比，香豆素由于其相對較低的消光系數(shù)而產(chǎn)生中等亮度和光穩(wěn)定性的熒光。

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藍(lán)色熒光探針最適合用于細(xì)胞骨架等高豐度靶標(biāo)的直接成像，細(xì)胞追蹤應(yīng)用，檢測酶活性和某些多色熒光應(yīng)用的底物-包括免疫熒光，核酸和蛋白質(zhì)微陣列，原位雜交和神經(jīng)元追蹤。

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光譜性質(zhì)

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表1. 7-氨基-4-三氟甲基香豆素（AMC）的光譜性質(zhì)。

圖1. AMCA（一種常用的香豆素衍生物）的激發(fā)和發(fā)射光譜。

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iFluor?350-替代物——AMCA和AlexaFluor?350

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iFluor?350染料是一種與AMCA光譜相似的亮藍(lán)色熒光染料，具有改善的水溶性，光穩(wěn)定性和更高的熒光量子產(chǎn)率。iFluor?350偶聯(lián)物非常適合于高豐度靶標(biāo)的直接成像，在多色應(yīng)用（例如流式細(xì)胞儀和超分辨率熒光顯微鏡）中特別有用，而不會影響綠色和紅色熒光探針的性能。

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圖2.將 HeLa細(xì)胞固定在4％甲醛中，然后用Phalloidin iFluor?350偶聯(lián)物和Nuclear Orange?DCS1染色。

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表2. iFluor?350——AMCA和AlexaFluor?350的替代產(chǎn)品

香豆素相關(guān)產(chǎn)品有哪些？

包括用于標(biāo)記肽，蛋白質(zhì)和其他生物分子的活性染料，綴合物，指示劑和用于檢測細(xì)胞，勻漿和溶液中酶活性的底物。

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1.反應(yīng)性香豆素染料

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反應(yīng)性熒光香豆素和香豆素衍生物廣泛用于共價(jià)標(biāo)記生物分子，例如抗體，碳水化合物，核酸，蛋白質(zhì)，肽和寡核苷酸。香豆素共軛物可產(chǎn)生適度明亮和光穩(wěn)定的藍(lán)色熒光，當(dāng)與綠色，黃色或紅色熒光探針結(jié)合使用時(shí)，通常用作檢測酶活性或在彩色熒光研究中提供對比的底物。香豆素和香豆素衍生物很容易在各種染料標(biāo)記化學(xué)中獲得，包括：

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琥珀酰亞胺酯/ NHS酯-用于標(biāo)記抗體，蛋白質(zhì)，肽，胺修飾的寡核苷酸和其他生物分子上的游離胺（-NH？）

馬來酰亞胺-用于標(biāo)記抗體，蛋白質(zhì)和肽上的巰基

疊氮化物-通過點(diǎn)擊化學(xué)法標(biāo)記亞乙基

炔烴-通過點(diǎn)擊化學(xué)法標(biāo)記疊氮化物

酰肼-用于標(biāo)記醛基和酮基

羧酸-用碳二亞胺預(yù)活化后標(biāo)記胺，或用于醇類的Steglich酯化

胺-用于標(biāo)記各種親電子化合物，例如活化的酯

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表3. 可用的反應(yīng)性香豆素和香豆素衍生物。

Note：ε= 在其zui大吸收波長處的摩爾消光系數(shù)（單位= cm -1 M -1）

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2. 香豆素標(biāo)記的酶底物

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香豆素和香豆素衍生物經(jīng)常用于制備熒光底物，以檢測細(xì)胞和溶液中的酶活性。當(dāng)被目的酶水解時(shí)，香豆素修飾的底物顯示出與酶活性成線性比例的熒光強(qiáng)度增加。AAT Bioquest提供了多種香豆素修飾的底物，可用于檢測Caspase，蛋白酶，肽酶，磷酸酶等的活性。

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表4. 可用香豆素標(biāo)記的熒光底物。

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3.香豆素標(biāo)記的綴合物

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香豆素標(biāo)記的結(jié)合物因其亮藍(lán)色熒光和出色的光穩(wěn)定性而在生物成像和生物標(biāo)記中具有廣泛的應(yīng)用。香豆素衍生物可以標(biāo)記抗體，鏈霉親和素，鬼筆環(huán)肽，膜聯(lián)蛋白v和其他生物分子，以研究細(xì)胞凋亡，標(biāo)記細(xì)胞器或通過放大微弱信號來提高測定靈敏度。

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表5.可用香豆素標(biāo)記的綴合物。

香豆素及其衍生物鏈接：?

?https://www.amyjet.com/featured/amc.shtml/featured/amc.shtml