OG 488 BAPTA-1 AM

OG 488 BAPTA-1 AM(244167-57-5)是一種可滲透細(xì)胞的熒光標(biāo)記Ca2+指示劑，由細(xì)胞可滲透Ca2+螯合劑（BAPTA AM）偶聯(lián)的綠色熒光探針（OG 488）組成。Ca2+結(jié)合后，熒光強(qiáng)度比靜息強(qiáng)度增加約14倍。顯示均勻的細(xì)胞分布，亞細(xì)胞區(qū)隔最少。激發(fā)/發(fā)射λ494/523 nm。

圖1.OG 488 BAPTA-1 AM分子結(jié)構(gòu)

圖2.OG 488 BAPTA-1 AM熒光光譜

Cal-520 AM

Cal-520 AM 為檢測細(xì)胞內(nèi)鈣動(dòng)員提供了一種強(qiáng)大的基于均質(zhì)熒光的檢測工具。Cal-520 AM是一種新型熒光鈣敏感染料，與現(xiàn)有的綠色鈣指示劑（如Fluo-3 AM和Fluo-4 AM）相比，具有顯著改善的信噪比和細(xì)胞內(nèi)保留。表達(dá)通過鈣發(fā)出信號的GPCR或感興趣的鈣通道的細(xì)胞可以預(yù)加載可以穿過細(xì)胞膜的Cal-520 AM。一旦進(jìn)入細(xì)胞，Cal-520 AM的親脂性封閉基團(tuán)就會被酯酶切割，從而產(chǎn)生帶負(fù)電荷的熒光染料留在細(xì)胞內(nèi)。與鈣結(jié)合后，其熒光大大增強(qiáng)。當(dāng)細(xì)胞用激動(dòng)劑刺激時(shí)，受體發(fā)出細(xì)胞內(nèi)鈣釋放信號，這顯著增加Cal-520的熒光。Cal-520 AM波長長、靈敏度高、熒光增強(qiáng)>100倍的特點(diǎn)，是測量細(xì)胞鈣的理想指標(biāo)。高信噪比和更好的細(xì)胞內(nèi)保留使 Cal-520 鈣測定成為評估 GPCR 和鈣通道靶標(biāo)以及篩選其激動(dòng)劑和拮抗劑的強(qiáng)大工具。

圖3.沒有丙磺舒的CHO-M1細(xì)胞中內(nèi)源性P2Y受體對ATP的反應(yīng)。將CHO-M1細(xì)胞在96孔黑壁/透明底板中以每100μL/孔40,000個(gè)細(xì)胞接種過夜。將100μl4μMFluo-3AM，F(xiàn)luo-4AM或Cal 520 AM在HHBS中加入孔中，并將細(xì)胞在37℃下孵育2小時(shí)。用100μlHHBS替換染料加載培養(yǎng)基，加入50μl300μMATP，然后使用FITC通道用熒光顯微鏡（Olympus IX71）成像。