肝纖維化動(dòng)物模型【動(dòng)物實(shí)驗(yàn)代做】

【造模機(jī)制】玉米粉僅含 9%蛋白質(zhì),只能滿足鼠正常蛋白質(zhì)需要量的一半,且玉米粉的蛋白質(zhì)中缺乏色氨酸與蛋氨酸,這些氨基酸屬趨脂物質(zhì),缺乏會(huì)導(dǎo)致肝脂肪變,以致纖維化,加入膽固醇增加機(jī)體對(duì)膽堿需要量,從而加速脂肪肝的發(fā)展。脂肪變性的肝細(xì)胞對(duì)CCl,損傷作用敏感,故肝細(xì)胞大量壞死,網(wǎng)狀支架塌陷,纖維增生,發(fā)展為肝硬化。

【造模方法】

1.取 Wistar 或 SD 大鼠,皮下注射 40％~50%CCI,油溶液,按 0.03ml/kg,每周 2 次。第2周開始,隔日以 20％～30%酒精 1ml灌胃。飼以混有 0.5%膽固醇低膽堿飲料,連續(xù) 8周。大鼠肝臟正常結(jié)構(gòu)破壞,形成厚的纖維間隔,并分割形成假小葉。

2.取雄性 SD 大鼠,200g 左右,飼喂單純玉米粉(前 2 周加豬油 70%,混以 0.5％膽固醇,并以 5%乙醇為飲料)。于實(shí)驗(yàn)第 1 天,每只動(dòng)物皮下注射 40%CCI 花生油溶液 0.5ml/100g,以后每隔 3 天皮下注射 40％CCI 花生油溶液 0.3ml/100g 造模。

【模型特點(diǎn)】復(fù)制肝纖維化模型中存在的問題是時(shí)間長(zhǎng)、形成率低,且死亡率高。相比較之下,本法周期已經(jīng)縮短,如果大鼠單純膽堿缺乏飲食形成模型需 200 天左右;膽堿加蛋白質(zhì)缺乏性飲食形成模型需 120 天左右;皮下注射 CCL 0.1ml/(150～200)g,每星期 2 次,需 120 天左右。本法復(fù)合因素 42 天即可形成。

【應(yīng)用范圍】肝纖維化是多種慢性肝病向肝硬化發(fā)展的必經(jīng)之路，該模型適合肝纖維化發(fā)病機(jī)制和防治措施的研究。特別適合于已經(jīng)引起肝細(xì)胞損傷為始動(dòng)機(jī)制的肝硬化發(fā)生發(fā)展過程的動(dòng)態(tài)研究。已廣泛用于中藥防治肝纖維化、肝硬化研究。

【注意事項(xiàng)】1.肝纖維化所測(cè)血清生化學(xué)指標(biāo) 要求與急慢性肝損傷模型類似,可選擇幾項(xiàng)進(jìn)行,但必須測(cè)定血或肝組織羥脯氨酸含量和肝膠原蛋白含量。

2.病理組織學(xué)觀察十分重要 可采用 HE 染色和膠原纖維染色等方法進(jìn)行。側(cè)重于成纖維細(xì)胞、纖維細(xì)胞和增生的膠原纖維的觀察。

【模型評(píng)價(jià)】本模型采用復(fù)合因素造模,不但肝纖維化進(jìn)展穩(wěn)定,成?？煽?而且復(fù)制時(shí)間大大縮短,是目前較為理想的一種肝纖維化模型。

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