CRISPR系統(tǒng)為代表的基因編輯工具發(fā)展迅猛被廣泛應(yīng)用?；贑RISPR/CAS9系統(tǒng)開發(fā)的新的先導(dǎo)編輯系統(tǒng)(Prime editing, PE)也逐漸引起人們的關(guān)注。PE是David Liu實驗室于2019年開發(fā)的精準(zhǔn)基因編輯系統(tǒng)，其最大的優(yōu)勢在于多樣的編輯類型，包括多位點（Multiple sites）編輯、DNA短片段插入和缺失（<100bp）。相比于傳統(tǒng)的HDR（Homologous Directed Recombination），PE無需DSB（Double Strand Break）即可實現(xiàn)編輯，因此更加高效、安全。同樣PE也存在其限制條件，包括（1）較低的編輯效率（2）pegRNA設(shè)計相對困難（3）PE的遞送問題等等。

2021年10月14日，美國哈佛大學(xué)David Liu實驗室與普林斯頓大學(xué)Britt Adamso實驗室合作在Cell雜志上發(fā)表了題為Enhanced prime editing systems by manipulating cellular determinants of editing outcomes的論文，給出了關(guān)于PE系統(tǒng)的進(jìn)一步解決方案。

PE系統(tǒng)原理

PE2: 將經(jīng)過改造的向?qū)NA（pegRNA）與prime editor蛋白相結(jié)合，pegRNA具有雙重功能，既能夠?qū)⒕庉嫷鞍滓龑?dǎo)到目標(biāo)位點，又含有編輯的模板序列。prime editor蛋白則由Cas9切口酶和逆轉(zhuǎn)錄酶融合而成。在Cas9切割目標(biāo)位點之后，逆轉(zhuǎn)錄酶以pegRNA作為模板進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，然后將DNA直接聚合到切口的DNA鏈上。
PE3: 在PE2系統(tǒng)基礎(chǔ)上添加一條sgRNA，會在另一條未切割的基因組單鏈上造成一個缺口，增加重組的概率。

PE4&5:在2021年的研究中，分別在PE2和PE3的基礎(chǔ)上通過共轉(zhuǎn)染MLH1dn抑制DNA錯配修復(fù)（MMR）通路從而有效增強PE系統(tǒng)的基因編輯效果。

功能驗證

PE系統(tǒng)在293T上的驗證，表現(xiàn)出與傳統(tǒng)CRISPR系統(tǒng)的特點：較高的編輯效率，較低的非預(yù)期編輯

總體而言，Prime Editing展現(xiàn)出在基因編輯領(lǐng)域美好的前景，也為疾病的基因治療提供了更加強大的工具。

以上內(nèi)容由海星生物提供?

我們的服務(wù)：CRISPR/Cas9細(xì)胞基因編輯、載體構(gòu)建/病毒包裝、分子診斷標(biāo)準(zhǔn)品/突變基因標(biāo)準(zhǔn)品/融合基因標(biāo)準(zhǔn)品、細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)/細(xì)胞干擾

我們的產(chǎn)品：HyCyte干細(xì)胞/原代細(xì)胞/細(xì)胞株、三系誘導(dǎo)培養(yǎng)試劑、ClonePlus 專用培養(yǎng)基、基因編輯試盒、病毒現(xiàn)貨、細(xì)胞專用血清