蛋白質(zhì)測(cè)序Edman
Edman降解法是瑞典化學(xué)家于1967年發(fā)明的一種測(cè)序方法,用于蛋白質(zhì)或多肽N末端序列分析,基于Edman降解法的測(cè)序儀也是第一臺(tái)蛋白質(zhì)測(cè)序儀。?
Edman降解法進(jìn)行蛋白質(zhì)或多肽N末端序列分析是一個(gè)循環(huán)式的化學(xué)反應(yīng)過(guò)程,主要包括3個(gè)主要步驟:第一步就是發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng),利用異硫氰酸苯酯(PITC)與蛋白質(zhì)多肽的N末端氨基酸殘基結(jié)合形成苯氨基硫甲酰(PTC)衍生物,即PTC-肽。然后在三氟乙酸的作用下進(jìn)行環(huán)化裂解,利用三氟乙酸處理PTC-肽,使N末端氨基酸被選擇性的切斷,釋放出該氨基酸殘基的噻唑啉酮苯胺(ATZ)衍生物。最后利用該ATZ-衍生物的有機(jī)溶液從反應(yīng)液中萃取出來(lái),ATZ-衍生物不穩(wěn)定,需通過(guò)酸化處理將其轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定的苯乙內(nèi)酰硫脲(PTH)衍生物,即PTH氨基酸,然后對(duì)該氨基酸進(jìn)行鑒定。這一系列反應(yīng)如此循環(huán),每次循環(huán)鑒定一個(gè)切下的末端氨基酸,直到完成N末端氨基端的序列測(cè)定。?
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