7-氨基-4-氯甲基香豆素是一種非常適合監(jiān)測(cè)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)或位置的熒光染料。這種染料保留得很好，可以對(duì)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)進(jìn)行多代跟蹤。 藍(lán)色激發(fā)/發(fā)射光譜非常適合與綠色和紅色熒光染料和蛋白質(zhì)進(jìn)行多路復(fù)用。

圖1.7-氨基-4-氯甲基香豆素化學(xué)結(jié)構(gòu)

7-氨基-4-氯甲基香豆素基礎(chǔ)信息

中文名：7-氨基-4-氯甲基香豆素

英文名：7-amino-4-chloromethylcoumarin

結(jié)構(gòu)式：c1cc2c(cc(=O)oc2cc1N)CCl

分子式：C10H8ClNO2

分子量：209.629

閃點(diǎn)：201.9±28.7 °C

沸點(diǎn)：410.3±45.0 °C at 760 mmHg

極化度：21.2±0.5 10-24cm3

密度 ：1.4±0.1 g/cm3

蒸汽壓：0.0±1.0 mmHg at 25°C

溶解度：溶于 DMSO

性狀：固體粉末

儲(chǔ)藏條件：-4℃條件下存儲(chǔ)，避光保存

實(shí)驗(yàn)步驟：
1. 使用無水DMSO將 7-氨基-4-氯甲基香豆素固體溶解，配成10 mM的儲(chǔ)存液。使用無血清的培養(yǎng)基將儲(chǔ)存液稀釋至 0.5~25 μM 的工作液。在使用之前將工作液置于 37℃進(jìn)行預(yù)熱。
2. 根據(jù)不同的細(xì)胞類型在不同的細(xì)胞培養(yǎng)條件下孵育 15~45 分鐘。對(duì)于懸浮細(xì)胞，離心棄上清，收集細(xì)胞沉淀。用預(yù)熱的染色液重懸細(xì)胞；對(duì)于貼壁細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)到合適的細(xì)胞密度，移除上清培養(yǎng)液，加入預(yù)熱的染色液。
3. 移除染色液，加入新鮮預(yù)熱的細(xì)胞培養(yǎng)基，37℃環(huán)境下孵育 30 分鐘。
4. 對(duì)于懸浮細(xì)胞，吸取 5 μl 染色后的細(xì)胞滴至載玻片上，加蓋蓋玻片，置于熒光顯微鏡下觀察；對(duì)于貼壁細(xì)胞，直接觀察即可。（可選）如需固定細(xì)胞，可先跳過步驟 4，待固定步驟完成后再做觀察準(zhǔn)備。
5. 使用 PBS 清洗細(xì)胞。
6. 使用含有 3.7%多聚甲醛的 PBS 固定細(xì)胞，室溫孵育 15 分鐘。
7. 使用 PBS 清洗細(xì)胞。
8. 如果需要可對(duì)細(xì)胞膜進(jìn)行透化處理。當(dāng)細(xì)胞需要進(jìn)行抗體標(biāo)記時(shí)，細(xì)胞膜的透化處理是有必要的，便于促進(jìn)抗原進(jìn)入細(xì)胞?？梢允褂帽浔幚砑?xì)胞 10 分鐘，可以提供細(xì)胞的滲透性。

——biofount范德生物（貨號(hào)：HCQ000962）