活化的血小板釋放生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子等活性物質(zhì)，在創(chuàng)傷愈合過(guò)程中發(fā)揮重要作用，來(lái)源于血小板的外泌體（Extracellular vesicles, EVs）攜帶上述活性物質(zhì)，有望成為治療慢性傷口的潛在藥物。

研究背景

傷口愈合延遲在健康個(gè)體身上很少發(fā)生，但對(duì)于罹患糖尿病、心血管病等疾病的患者，其基礎(chǔ)疾病的存在促進(jìn)了慢性傷口的形成。在傷口愈合過(guò)程中，血小板釋放的生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子等生物活性物質(zhì)發(fā)揮了重要作用。由于這些生物活性物質(zhì)同樣存在于血小板EVs（platelet EVs, pEVs）中，將pEVs用于治療慢性傷口成為可能。

研究?jī)?nèi)容

在本研究中，作者通過(guò)基于配體的外泌體親和純化（ligand-based exosome affinity purification, LEAP）制備臨床級(jí)pEVs，并對(duì)其誘導(dǎo)傷口愈合的功能進(jìn)行了驗(yàn)證。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

對(duì)分離獲得的pEVs進(jìn)行表征鑒定，分析其產(chǎn)量、粒徑分布、形態(tài)及蛋白質(zhì)含量等特征。結(jié)果顯示，所得pEVs通過(guò)了無(wú)菌檢測(cè)和內(nèi)毒素檢測(cè)，且表征結(jié)果與預(yù)期相符。

蛋白質(zhì)譜分析結(jié)果顯示，pEVs含有多種已知與傷口愈合有關(guān)的糖蛋白，此外，還鑒定出了在傷口愈合重塑階段發(fā)揮重要作用的生長(zhǎng)因子。

通過(guò)一系列細(xì)胞實(shí)驗(yàn)（遷移實(shí)驗(yàn)、增殖實(shí)驗(yàn)、血管生成實(shí)驗(yàn)等）評(píng)估pEVs在傷口愈合中的生物學(xué)活性，結(jié)果顯示pEVs可被成纖維細(xì)胞（NHDFs）攝取，且經(jīng)pEVs處理的成纖維細(xì)胞表現(xiàn)出顯著的增殖活性。

用人真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞（HDMECs）評(píng)估pEVs促進(jìn)血管生成的潛力，結(jié)果顯示，培養(yǎng)5天后pEVs處理的HDMECs形成細(xì)微的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，提示pEVs可促進(jìn)血管生成。

評(píng)估pEVs對(duì)重要細(xì)胞通路（Akt信號(hào)通路、ERK信號(hào)通路）的影響，結(jié)果顯示，Akt磷酸化水平升高，ERK磷酸化水平升高，提示信號(hào)通路激活。

通過(guò)I期臨床試驗(yàn)對(duì)pEVs的安全性進(jìn)行評(píng)估，結(jié)果顯示受試者均無(wú)嚴(yán)重不良事件發(fā)生，未觀察到有臨床意義的異常，創(chuàng)面均順利愈合。

結(jié)論

研究表明，通過(guò)LEAP制備的臨床級(jí)pEVs在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出促進(jìn)傷口愈合的治療活性，I期臨床試驗(yàn)證實(shí)了pEVs在治療中的安全性，有望應(yīng)用于慢性傷口的臨床治療。

Johnson J, Law SQK, Shojaee M, Hall AS, Bhuiyan S, Lim MBL, Silva A, Kong KJW, Schoppet M, Blyth C, Ranasinghe HN, Sejic N, Chuei MJ, Tatford OC, Cifuentes-Rius A, James PF, Tester A, Dixon I, Lichtfuss G. First-in-human clinical trial of allogeneic, platelet-derived extracellular vesicles as a potential therapeutic for delayed wound healing. J Extracell Vesicles. 2023 Jul;12(7):e12332. doi: 10.1002/jev2.12332. PMID: 37353884; PMCID: PMC10290200.