熱蛋白質(zhì)組學(xué)(thermal proteome profiling, TPP)?是一種研究細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)相互作用的方法，也是目前蛋白質(zhì)組學(xué)中的熱點(diǎn)研究領(lǐng)域之一。熱蛋白質(zhì)組學(xué)的研究對象是細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)之間的相互作用，通過對這些相互作用的研究，可以深入了解蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的功能及其參與的生物學(xué)過程。

熱蛋白質(zhì)組學(xué)分析通過測量不同加熱溫度下細(xì)胞或細(xì)胞裂解物中可溶蛋白的含量來確定整個蛋白質(zhì)組的穩(wěn)定性。蛋白質(zhì)可以在與藥物或代謝物等小分子、核酸或其他蛋白質(zhì)相互作用或在翻譯后修飾時改變其熱穩(wěn)定性，而熱蛋白質(zhì)組學(xué)分析可以根據(jù)有無配體結(jié)合蛋白質(zhì)的熱穩(wěn)定性差異來確定靶蛋白。目前熱蛋白質(zhì)組學(xué)分析已成功應(yīng)用于識別藥物的靶點(diǎn)和脫靶點(diǎn)，探究蛋白質(zhì)-代謝物和蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)的相互作用。

熱蛋白質(zhì)組學(xué)分析原理

TPP是將細(xì)胞熱漂移測定 (cellular thermal shift assay, CETSA)的原理與基于多重定量質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學(xué)相結(jié)合。CETSA基于蛋白質(zhì)在受熱時變性并變得不溶的原理，通過在多個溫度下監(jiān)測剩余的可溶性餾分，可以獲得每種檢測到的蛋白質(zhì)的熔解曲線。蛋白質(zhì)的熱穩(wěn)定性可通過Tm，即蛋白質(zhì)解折疊50%時對應(yīng)的溫度來表示。蛋白質(zhì)在加熱過程中會發(fā)生熱變性解折疊，有配體結(jié)合的蛋白與無配體結(jié)合的蛋白相比一般更穩(wěn)定，Tm也更高，通過對比有無配體結(jié)合蛋白的Tm和熔解曲線是否存在差異即可確定靶蛋白。

熱蛋白質(zhì)組學(xué)分析技術(shù)流程

TPP主要包括溫度范圍的熱蛋白質(zhì)組學(xué)分析 (TPP temperature range, TPP- TR)、配體濃度范圍的熱蛋白質(zhì)組學(xué)分析 (TPP compound concentration range, TPP-CCR) 。主要的實(shí)驗(yàn)流程包括樣品制備、熱處理、收集可溶性蛋白組分、基于質(zhì)譜的蛋白組學(xué)分析（TMT標(biāo)記定量蛋白組學(xué)）、數(shù)據(jù)分析。

TPP-TR

TPP-TR是TPP最原始的方法，固定配體化合物濃度，在有無配體的兩種條件下梯度改變溫度，繪制蛋白質(zhì)熱熔變化曲線同時計(jì)算有無配體條件下每種蛋白的Tm 。

TPP-CCR

TPP-CCR側(cè)重于配體濃度的重要性，用不同濃度配體處理細(xì)胞材料，并在相同的溫度下加熱，然后進(jìn)行蛋白標(biāo)記、鑒定和定量，最后通過數(shù)據(jù)處理可以獲得每種蛋白質(zhì)的劑量反應(yīng)曲線。

熱蛋白質(zhì)組學(xué)分析應(yīng)用

經(jīng)過近幾年的發(fā)展，TPP的應(yīng)用范圍在不斷地?cái)U(kuò)大。在藥物發(fā)現(xiàn)中，TPP可以全面識別藥物的靶點(diǎn)和脫靶點(diǎn)，后者可以解釋藥物的不良反應(yīng)和再利用；TPP還可用于通過研究翻譯后修飾，例如已有研究表明磷酸化會影響蛋白質(zhì)的熱穩(wěn)定性；此外還可以研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用、核酸-蛋白質(zhì)相互作用或基本蛋白質(zhì)的功能來探索代謝途徑；TPP還可以與限制性蛋白水解或成像相結(jié)合，以進(jìn)一步了解蛋白質(zhì)折疊動力學(xué)。

技術(shù)特點(diǎn)與優(yōu)勢

1、體外、原位或者體內(nèi)都適用，反映天然狀態(tài)的結(jié)合情況；

2、無需進(jìn)行額外修飾；

3、材料來源廣泛：體液、組織、細(xì)胞和蛋白質(zhì)溶液；

4、可區(qū)分直接靶點(diǎn)或間接靶點(diǎn)信息；

5、專業(yè)的生信團(tuán)隊(duì)，負(fù)責(zé)的售后技術(shù)，一條龍服務(wù)。

熱蛋白質(zhì)組學(xué)送樣標(biāo)準(zhǔn)

熱蛋白質(zhì)組學(xué)分析高分文獻(xiàn)

現(xiàn)在，您是不是對熱蛋白質(zhì)組學(xué)有所了解？如果感興趣的話可以快快行動起來啦，小編也整理了近些年熱蛋白質(zhì)組學(xué)分析的高分文獻(xiàn)，希望能給您提供一些思路~