?離子交換層析的基本裝置及操作步驟與前面介紹的柱層析類似，這里就不再重復了。下面主要介紹離子交換層析操作中應注意的一些具體問題。

? 1. 層析柱

離子交換層析要根據(jù)分離的樣品量選擇合適的層析柱，離子交換用的層析柱一般粗而短，不宜過長。直徑和柱長比一般為1:10到1:50之間，層析柱安裝要垂直。裝柱時要均勻平整，不能有氣泡。

? 2. 平衡緩沖液

離子交換層析的基本反應過程就是離子交換劑平衡離子與待分離物質(zhì)、緩沖液中離子間的交換，所以在離子交換層析中平衡緩沖液和洗脫緩沖液的離子強度和pH的選擇對于分離效果有很大的影響。

平衡緩沖液是指裝柱后及上樣后用于平衡離子交換柱的緩沖液。平衡緩沖液的離子強度和pH的選擇首先要保證各個待分離物質(zhì)如蛋白質(zhì)的穩(wěn)定。其次是要使各個待分離物質(zhì)與離子交換劑有適當?shù)慕Y(jié)合，并盡量使待分離樣品和雜質(zhì)與離子交換劑的結(jié)合有較大的差別。一般是使待分離樣品與離子交換劑有較穩(wěn)定的結(jié)合。而盡量使雜質(zhì)不與離子交換劑結(jié)合或結(jié)合不穩(wěn)定。在一些情況下（如污水處理）可以使雜質(zhì)與離子交換劑有牢固的結(jié)合，而樣品與離子交換劑結(jié)合不穩(wěn)定，也可以達到分離的目的。另外注意平衡緩沖液中不能有與離子交換劑結(jié)合力強的離子，否則會大大降低交換容量，影響分離效果。選擇合適的平衡緩沖液，直接就可以去除大量的雜質(zhì)。并使得后面的洗脫有很好的效果。如果平衡緩沖液選擇不合適，可能會對后面的洗脫帶來困難，無法得到好的分離效果。

? 3. 上樣

離子交換層析的上樣時應注意樣品液的離子強度和pH值，上樣量也不宜過大，一般為柱床體積的1－5％為宜，以使樣品能吸附在層析柱的上層，得到較好的分離效果。

? 4. 洗脫緩沖液

在離子交換層析中一般常用梯度洗脫，通常有改變離子強度和改變pH兩種方式。改變離子強度通常是在洗脫過程中逐步增大離子強度，從而使與離子交換劑結(jié)合的各個組分被洗脫下來；而改變pH的洗脫，對于陽離子交換劑一般是pH從低到高洗脫，陰離子交換劑一般是pH從高到低。由于pH可能對蛋白的穩(wěn)定性有較大的影響，故一般通常采用改變離子強度的梯度洗脫。梯度洗脫的裝置前面已經(jīng)介紹了，可以有線性梯度、凹形梯度、凸形梯度以及分級梯度等洗脫方式。一般線性梯度洗脫分離效果較好，故通常采用線性梯度進行洗脫。

洗脫液的選擇首先也是要保證在整個洗脫液梯度范圍內(nèi)，所有待分離組分都是穩(wěn)定的。其次是要使結(jié)合在離子交換劑上的所有待分離組分在洗脫液梯度范圍內(nèi)都能夠被洗脫下來。另外可以使梯度范圍盡量小一些，以提高分辨率。

? 5. 洗脫速度

洗脫液的流速也會影響離子交換層析分離效果，洗脫速度通常要保持恒定。一般來說洗脫速度慢比快的分辨率要好，但洗脫速度過慢會造成分離時間長、樣品擴散、譜峰變寬、分辨率降低等副作用，所以要根據(jù)實際情況選擇合適的洗脫速度。如果洗脫峰相對集中某個區(qū)域造成重疊，則應適當縮小梯度范圍或降低洗脫速度來提高分辨率；如果分辨率較好，但洗脫峰過寬，則可適當提高洗脫速度。

? 6. 樣品的濃縮、脫鹽

離子交換層析得到的樣品往往鹽濃度較高，而且體積較大，樣品濃度較低。所以一般離子交換層析得到的樣品要進行濃縮、脫鹽處理。