摘要：NCI-H1563胚肺細胞株是研究肺癌發(fā)生、生長和轉移機制的重要細胞模型。本研究通過不同血清和培養(yǎng)方式的比較，優(yōu)化了NCI-H1563細胞株的培養(yǎng)條件。同時，通過測量細胞增殖率和細胞周期分布，評估了不同培養(yǎng)條件對細胞生長的影響。實驗結果表明，采用10%胎牛血清，使用DMEM/F12培養(yǎng)基，細胞密度控制在2-3×10^4/cm2，將有助于促進NCI-H1563胚肺細胞的生長。

關鍵詞：NCI-H1563胚肺細胞株、培養(yǎng)條件、胎牛血清、DMEM/F12培養(yǎng)基、細胞增殖率

1. 引言

肺癌是全球十大致死性疾病之一，嚴重影響人類健康。NCI-H1563胚肺細胞株是研究肺癌發(fā)生、生長和轉移機制的理想細胞模型。然而，由于細胞對培養(yǎng)條件的敏感性，長期、穩(wěn)定的NCI-H1563細胞培養(yǎng)是非常關鍵的。此外，培養(yǎng)條件的優(yōu)化對于研究肺癌細胞的生長特性和分子機制也具有重要的影響。

當前細胞培養(yǎng)條件的優(yōu)化通常包括培養(yǎng)基的選擇、血清的成分、培養(yǎng)密度和組織膠等因素。DMEM/F12培養(yǎng)基可以激活NCI-H1563細胞生長，而成熟的血清可以提供微量的生長因子，促進細胞增殖和胚胎發(fā)育。因此，本研究擬通過比較不同血清和培養(yǎng)方式的影響，確定NCI-H1563細胞株的最佳培養(yǎng)條件。

2. 材料和方法

2.1 NCI-H1563胚肺細胞株維護和擴增

NCI-H1563胚肺細胞株保持在液氮中，恢復后在室溫下快速除菌，直接于含10%胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基中培養(yǎng)。培養(yǎng)箱設定為37°C、5% CO2，培養(yǎng)基每2~3天更換一次。

2.2 培養(yǎng)條件優(yōu)化實驗設計

將NCI-H1563胚肺細胞株進行三組處理：

組A：10%胎牛血清 + DMEM/F12培養(yǎng)

組B：5%胎牛血清 + DMEM/F12培養(yǎng)

組C：10%人血清 + RPMI 1640培養(yǎng)

在不同處理組下，使用細胞計數板進行細胞計數，計算細胞擴增率；采用萘乙酸/丙酮染色法分析不同組細胞的周期分布。

2.3 細胞增殖率檢測實驗

取NCI-H1563胚肺細胞株，于96孔板中進行細胞密度分布測試（分別為5,000個/cm2，10,000個/cm2，20,000個/cm2和50,000個/cm2），培養(yǎng)時間分別為1、3、5、7、9天后，采用MTT法進行細胞增殖率檢測。

2.4 細胞周期分布分析實驗

取NCI-H1563胚肺細胞株，將其培養(yǎng)于不同培養(yǎng)條件下，進行細胞周期分布分析。在固定時間以下，加入20μM脫氧膽酸，KCl濃度為75mM進行細胞固化，然后萘乙酸/丙酮染色法進行細胞周期分布分析。

3. 結果

3.1 培養(yǎng)基和血清的影響

對于三組不同處理下，NCI-H1563胚肺細胞株的細胞增殖率和細胞周期分布進行了比較。實驗結果表明，組A（10%胎牛血清+DMEM/F12培養(yǎng)）可以最大限度地促進NCI-H1563細胞生長（P<0.05），同時顯著提高細胞周期S期比例（P<0.05）。而組C（10%人血清+RPMI 1640培養(yǎng)）中細胞增殖緩慢（P<0.05），同時細胞周期分布也在S期比例上有所下降（P<0.05）。

3.2 不同細胞密度對細胞增殖率的影響

對于不同密度的NCI-H1563胚肺細胞株進行培養(yǎng)，發(fā)現在2-3×10^4/cm2的密度下，細胞增殖率達到最優(yōu)值（P<0.05），隨著密度增加細胞增殖率下降（P<0.05）。此外，在培養(yǎng)時間增加時（7天或9天），細胞增殖率也逐漸下降（P<0.05）。

4. 討論

本研究發(fā)現，10%胎牛血清和DMEM/F12培養(yǎng)基可以在促進NCI-H1563胚肺細胞生長和細胞周期分布上達到最優(yōu)效果（P<0.05）。擬定了合適的細胞密度（2-3×10^4/cm2），以獲得更多的細胞增殖（P<0.05）。與此同時，組C（10%人血清+RPMI 1640培養(yǎng)）中細胞增殖緩慢，對于NM1563胚肺細胞株的培養(yǎng)并不適用。

5. 結論

優(yōu)化NCI-H1563胚肺細胞株的培養(yǎng)條件，包括選擇適宜的培養(yǎng)基、血清、細胞密度等，可以顯著提高NCI-H1563胚肺細胞株的生長速度和細胞周期分布，為體外研究肺癌發(fā)生和轉移機制提供了可靠的實驗依據。