H9C2(2-1)細胞是一株由Kimes·B和Brandt·B從BD1X大鼠胚胎心臟組織的克隆細胞株亞克隆得到的細胞株；H9c2(2-1)細胞表現(xiàn)出許多骨骼肌的特性。H9C2(2-1)細胞中的成肌細胞能融合形成多核的肌管，并對乙酰膽堿的刺激發(fā)生反應(yīng)。如果培養(yǎng)基中的血清濃度下降到1%，H9c2(2-1)細胞融合發(fā)生得很快。

H9C2細胞基本信息

細胞名稱：大鼠心肌細胞（H9C2）

細胞別名：H9c2 (2-1); H9c2; H9C2

產(chǎn)品貨號：TCR-C607

種屬來源：大鼠

組織來源：心臟/心肌層

細胞形態(tài)：成肌細胞樣

生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)體系：DMEM-H+10%FBS+1%Glutamax+1%P/S

傳代比例：1:3-1:4，每2-3天換液一次

傳代周期：48-72 h

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%CO2，溫度：37℃

凍存條件：60%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO，液氮儲存

質(zhì)量檢測：細菌、真菌、支原體檢測均為陰性
參考文獻：

Kimes BW, Brandt BL. Properties of a clonal muscle cell line from rat heart. Exp. Cell Res. 98: 367-381, 1976. PubMed: 943302

Levy AP, et al. Post-transcriptional regulation of vascular endothelial growth factor by hypoxia. J. Biol. Chem. 271: 2746-2753, 1996. PubMed: 8576250

H9C2細胞復(fù)蘇

推薦使用海星生物H9C2細胞配套專用培養(yǎng)基
貨號：TCR-G607(1) 開啟37℃水浴鍋。預(yù)熱完全培養(yǎng)基，提前將細胞從液氮中取出，放于-80℃冰箱，讓凍存管中液氮揮發(fā)。(2)?潔凈工作臺內(nèi)準(zhǔn)備15 mL離心管，加入5 mL預(yù)熱的完全培養(yǎng)基。(3)?從-80℃冰箱中取出細胞?？焖賹龃婀苤糜?7℃水浴鍋內(nèi)，快速晃動，使凍存液迅速融化。注意: ① 融化過程必須晃動凍存管，保證凍存液融化均勻?；蝿訒r應(yīng)避免水沒過管蓋增加污染風(fēng)險。

? ? ? ? ② 管內(nèi)凍存液融化至只剩一個約2mm直徑的冰晶時，可停止水浴。繼續(xù)晃動凍存管至冰晶融化。

(4)?用75%酒精消毒凍存管表面。在潔凈工作臺內(nèi)小心開蓋，盡量避免氣泡溢出，輕柔吹打數(shù)次，轉(zhuǎn)移至預(yù)先準(zhǔn)備的離心管內(nèi)。用少量完全培養(yǎng)基洗滌凍存管1~2次，一并收集至離心管內(nèi)。

(5)?250 g離心4 min。離心后去除上清。加入2 mL完全培養(yǎng)基，輕柔吹打細胞沉淀，充分吹散、混勻。（如有臺盼藍可取少量細胞懸液進行染色計數(shù)）

(6)?將細胞平均接種到1個T25培養(yǎng)瓶或底面積相當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)容器中，加入足量完全培養(yǎng)基，搖勻細胞，將培養(yǎng)容器放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

(7)?復(fù)蘇次日，觀察細胞狀態(tài)并換液。

H9C2細胞傳代

細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

(1) 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗H9C2細胞1-2次。

(2) 加入1 mL 0.25%Trypsin-0.02%EDTA 消化液于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-3 min，然后在顯微鏡下觀察H9C2細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

(3) 按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

(4) 將H9C2細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

H9C2細胞凍存

推薦使用海星一步凍存液（即用型、無血清、無需程序降溫）
貨號：GUCP-R201

待H9C2細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例

(1) 收集H9C2細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，然后進行細胞計數(shù)。(2) 據(jù)H9C2細胞數(shù)量對應(yīng)加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。(3) 將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

常見問題

(1) H9C2細胞可以傳幾代?

H9C2細胞系理論上是可以無限傳代的，但是研究發(fā)現(xiàn)細胞系也會有老化的；收到細胞后自己具體可以傳多少代，會受到客戶自己養(yǎng)細胞的操作水平技術(shù)，操作環(huán)境，用的試劑耗材的質(zhì)量等因素影響。

(2) 為什么H9c2細胞培養(yǎng)長得慢？這些因素都會影響細胞長得慢①可能是細胞接種得太少，細胞密度太低?？梢韵扰囵B(yǎng)，然后消化重新鋪瓶，提高密度培養(yǎng)②操作時力度沒控制好，將細胞吹碎，狀態(tài)變差③血清質(zhì)量不好，影響細胞生長

(4) 為什么H9c2細胞培養(yǎng)會出現(xiàn)空泡？①可能是鋪板時鋪得不夠均勻，局部過于密集，密集地方的細胞就開始狀態(tài)變差、空泡增多②也可能是血清差，需要更換優(yōu)質(zhì)血清，及時換液。
(5) 為什么會出現(xiàn)細胞表面顆粒較多的現(xiàn)象？可能是培養(yǎng)環(huán)境有問題，可以改用DMEM/F-12培養(yǎng)基培養(yǎng)，傳三代后會恢復(fù)平整細胞表面。

(6) 為什么細胞狀態(tài)變差，容易漂？

①可能是血清問題，建議換血清，并注意血清要程序解凍，不能水浴化開

②也有可能是細胞生長密集，需要及時傳代，并不是細胞長滿才傳代，當(dāng)有個別地方長得過于密集，容易疊加的時候應(yīng)該就要傳代了

以上內(nèi)容由海星生物提供 （hycyte.com）

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