如何判斷您養(yǎng)的乳腺癌類器官對(duì)不對(duì)？伯楨類器官應(yīng)用工程師為各位老師整理了標(biāo)準(zhǔn)化的乳腺癌類器官圖鑒，還原乳腺癌類器官生長全過程和鑒定，供老師們參考，快來查收吧~

本文所有類器官全部由伯楨乳腺癌類器官試劑盒（K2147-BC）培養(yǎng)。

乳腺癌類器官的生長過程

乳腺癌類器官原代培養(yǎng)

1例乳腺癌類器官原代(P0)培養(yǎng)生長過程示例：

該例樣本初始分離獲得的腫瘤組織以單細(xì)胞和較小的細(xì)胞團(tuán)為主（Fig.A），在生長至第3天時(shí)可觀察到明顯的3D細(xì)胞球（Fig.B），繼續(xù)生長至第6天這些細(xì)胞球直徑明顯增大，達(dá)到傳代水平（Fig.C）。

乳腺癌類器官傳代培養(yǎng)

1例乳腺癌類器官傳代后（P2代）生長過程示例，經(jīng)消化的類器官在傳代培養(yǎng)起始時(shí)常為單細(xì)胞或不規(guī)則細(xì)胞團(tuán)塊的狀態(tài)，這些單細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)塊可在傳代后3天左右形成新的3D細(xì)胞球克隆，繼續(xù)生長至第6天時(shí)直徑明顯增大，在生長至第11天時(shí)，可觀察到部分類器官有較大的空腔，類器官直徑約為100-150μm。

乳腺癌組織和類器官鑒定

乳腺癌組織和類器官HE染色

HE染色顯示乳腺癌組織和類器官的組織內(nèi)細(xì)胞的細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)顏色以及核質(zhì)比均近似，乳腺癌組織和類器官的細(xì)胞間排布紊亂伴隨腺腔結(jié)構(gòu)，提示類器官和來源組織在組織形態(tài)上相似（比例尺：50μm）。? ? ? ? ? ? ??

乳腺癌組織和類器官IHC鑒定

Ki67（細(xì)胞增殖的組化標(biāo)志物）免疫組織化學(xué)染色：

由Fig.A和Fig.B可見在乳腺癌組織中含有大量Ki67陽性細(xì)胞，乳腺癌類器官中央及空腔周圍細(xì)胞內(nèi)均有Ki67表達(dá)，提示腫瘤增殖程度較快。

ER免疫組織化學(xué)染色：

Fig.C乳腺癌組織和Fig.D乳腺癌類器官，ER在細(xì)胞核上表達(dá)；

HER2免疫組織化學(xué)染色：

Fig.E乳腺癌組織和Fig.F乳腺癌類器官，HER2在細(xì)胞膜上表達(dá)；

ER、HER2是乳腺癌的常見分子分型標(biāo)志物。由Fig.C、Fig.D和Fig.E、Fig.F 可見腫瘤組織和對(duì)應(yīng)類器官在乳腺癌組化標(biāo)志物上的一致性（比例尺：100μm）。

乳腺癌類器官的免疫熒光染色

以上乳腺癌類器官全部由伯楨乳腺癌類器官試劑盒（K2147-BC）培養(yǎng)。

乳腺癌類器官論文集

伯楨類器官應(yīng)用工程師為大家統(tǒng)計(jì)了70篇影響因子15分以上乳腺癌類器官文獻(xiàn)，并選取一部分有代表性的文獻(xiàn)進(jìn)行導(dǎo)讀。需要的老師可掃碼添加小助手領(lǐng)取~

乳腺癌類器官論文解讀

乳腺癌是全球女性最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率居女性惡性腫瘤之首。隨著生活方式的改變，我國乳腺癌的發(fā)病率逐年升高，并且呈現(xiàn)出低齡化趨勢(shì)。乳腺癌有超過20種亞型，它們?cè)谶z傳學(xué)、組織學(xué)和臨床特征方面都有差異，目前主要使用腫瘤細(xì)胞系和腫瘤異種移植模型(PDX)進(jìn)行乳腺癌研究。但是兩種模型均存在一定的局限性，如腫瘤細(xì)胞系可能會(huì)出現(xiàn)交叉污染、基因型會(huì)發(fā)生改變以及難以永久增殖等問題，PDX模型具有構(gòu)建成功率低、周期長以及不能進(jìn)行高通量藥物篩選等缺點(diǎn)。而患者腫瘤來源的類器官與體內(nèi)腫瘤組織高度相似，并可以高度保持體內(nèi)腫瘤組織的異質(zhì)性，具有培養(yǎng)速度快、培養(yǎng)周期短、成功率較高等優(yōu)點(diǎn)[1]。乳腺癌類器官的建立，為探究乳腺癌發(fā)生發(fā)展機(jī)制、藥物篩選以及個(gè)性化治療方案等開辟了新的途徑，為乳腺癌治療帶來了新的希望。

點(diǎn)此展開

影響因子20分以上的文獻(xiàn)

1

乳腺癌類器官樣本庫建立

文獻(xiàn)題目：A Living Biobank of Breast Cancer Organoids Captures Disease Heterogeneity[2]

通訊作者：Hans?Clevers

發(fā)表時(shí)間：2018.01.11

期刊名稱：Cell

影響因子：66.85

文章內(nèi)容：乳腺癌（BC）包括多種不同的亞型，這些亞型在遺傳、病理和臨床上表現(xiàn)出不同的反應(yīng)。本研究描述了一種用于長期培養(yǎng)人乳腺上皮類器官的方案，共收集155例乳腺癌臨床樣本，成功構(gòu)建超過100種原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性乳腺癌類器官，廣泛地概括了乳腺癌疾病的多樣性。研究者通過免疫組化、測(cè)序等比較乳腺癌類器官和原腫瘤組織，結(jié)果發(fā)現(xiàn)乳腺癌類器官可以在體外再現(xiàn)原腫瘤的組織學(xué)和遺傳學(xué)特征，保留了體內(nèi)腫瘤的異質(zhì)性。同時(shí)藥物篩選結(jié)果表明，類器官藥物篩選與體內(nèi)異種移植和患者臨床反應(yīng)一致。綜上所述，本研究構(gòu)建的乳腺癌類器官樣本庫，可用于癌癥基礎(chǔ)研究、藥物開發(fā)以及個(gè)性化的治療。

2

乳腺癌類器官的基因操縱

文獻(xiàn)題目：

Modeling breast cancer using CRISPR-CAS9-mediated engineering of human breast organoids[3]

通訊作者：Jane E Visvader

發(fā)表時(shí)間：2020.05.01

期刊名稱：Journal of the National Cancer Institute

影響因子：10.3

文章內(nèi)容：本研究證實(shí)了通過乳房成形術(shù)中產(chǎn)生的乳腺構(gòu)建乳腺上皮類器官，能夠用于研究乳腺癌發(fā)生發(fā)展。為了研究腫瘤發(fā)生發(fā)展過程，我們利用CRISPR-Cas9，靶向敲除來自6個(gè)供體的乳腺細(xì)胞中的4個(gè)乳腺癌相關(guān)的腫瘤抑制基因（P53、PTEN、RB1、NF1），P53/PTEN/RB1//NF1突變的類器官可以穩(wěn)定增殖，最終形成雌激素受體陽性（ER+）的乳腺癌。此外這些乳腺癌類器官對(duì)內(nèi)分泌治療或化療均有反應(yīng)。以上的研究結(jié)果表明類器官成為研究乳腺癌驅(qū)動(dòng)基因的一種新方法。

3

乳腺癌類器官構(gòu)建和基因操縱

文獻(xiàn)題目：Long-term culture, genetic manipulation and xenotransplantation of human normal and breast cancer organoids[4]

通訊作者：Hans?Clevers

發(fā)表時(shí)間：2021.10.01

期刊名稱：Nature Protocols

影響因子：14.8

文章內(nèi)容：類器官技術(shù)已經(jīng)徹底改變了人類器官發(fā)育、疾病和治療反應(yīng)的研究。本研究提供了一個(gè)優(yōu)化的、高度通用的方案，用于長期培養(yǎng)來自正常人類乳腺組織或乳腺癌組織的類器官，以及45例生物庫樣本，包括涵蓋所有主要疾病亞型的乳腺癌類器官。此外作者還提供轉(zhuǎn)染、電穿孔或慢病毒的類器官基因操縱方法。最后，研究者介紹了一種優(yōu)化小鼠原位類器官移植的方法，包括注射類器官和雌激素，無需進(jìn)行手術(shù)。總之，組織衍生的類器官構(gòu)建需要7-21天，基因操縱的類器官培養(yǎng)需要14-21天，來自異種移植瘤的類器官培養(yǎng)需要4周以上。

4

乳腺癌類器官用于乳腺癌藥物篩選

文獻(xiàn)題目：An organoid-based screen for epigenetic inhibitors that stimulate antigen presentation and potentiate T-cell-mediated cytotoxicity[5]

通訊作者：Lu, Xiongbin

發(fā)表時(shí)間：2021.11.05

期刊名稱：Nature Biomedical Engineering

影響因子：28.1

文章內(nèi)容：乳腺癌的高度異質(zhì)性、缺乏有效靶點(diǎn)和免疫逃避是導(dǎo)致免疫檢查點(diǎn)抑制劑治療失敗的主要原因，本研究報(bào)告了基于小鼠或患者來源的乳腺癌類器官和腫瘤特異性T細(xì)胞相互作用的高通量篩選，以鑒定促進(jìn)抗原呈遞和增強(qiáng)T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性的表觀遺傳抑制劑。研究發(fā)現(xiàn)，通過篩選鑒定的表觀遺傳抑制劑GSK-LSD1、CUDC-101和BML-210在小鼠原位乳腺癌中顯示出抗腫瘤活性，它們上調(diào)了乳腺腫瘤細(xì)胞上主要組織相容性復(fù)合體I類介導(dǎo)的抗原呈遞，用BML-210治療可增加乳腺癌類器官對(duì)PD-1敏感性。綜上所述，腫瘤類器官-T細(xì)胞鑒定促進(jìn)了抑制劑對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷活性，有助于確定癌癥的候選免疫療法。

5

乳腺癌類器官用于乳腺癌機(jī)制研究

文獻(xiàn)題目：A novel polypeptide CAPG-171aa encoded by circCAPG plays a critical role in triple-negative breast cancer[6]

通訊作者：Li, Xiangdong

發(fā)表時(shí)間：2023.07.05

期刊名稱：Molecular Cancer

影響因子：41.444

文章內(nèi)容：本研究旨在闡明circRNA在三陰性乳腺癌（TNBC）的病理學(xué)和癌變中的作用。為了確定circCAPG的多肽編碼功能，研究者通過測(cè)定細(xì)胞增殖、凋亡和轉(zhuǎn)移參數(shù)，探討CAPG-171aa在TNBC類器官和PDX中的作用。機(jī)制上，通過免疫沉淀分析和質(zhì)譜分析驗(yàn)證了TNBC中CAPG-171aa和STK38之間的關(guān)系。通過RIP-qPCR實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了SLU7與其在circCAPG上的結(jié)合位點(diǎn)之間的相互作用，同時(shí)敲低circCAPG能夠顯著抑制TNBC類器官的生長。綜上所述，circCAPG通過編碼新型多肽CAPG-171aa，激活MEKK2-MEK1/2-ERK1/2通路，顯著促進(jìn)TNBC細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。此外，cirCAPG的形成是由SLU7介導(dǎo)的。本研究表明蛋白質(zhì)編碼circRNA CAPG-171aa可以作為TNBC的預(yù)后生物標(biāo)志物和潛在治療靶點(diǎn)。

總結(jié)：

1、乳腺癌是一類高度異質(zhì)性的疾病，可分為Luminal A、Luminal B、Her-2陽性、三陰性乳腺癌等4種亞型。

2、乳腺癌類器官能夠重現(xiàn)患者體內(nèi)腫瘤的組織病理學(xué)特性和遺傳學(xué)特征。

3、乳腺癌類器官生物樣本庫可用于高通量藥物篩選、疾病機(jī)制研究和個(gè)性化治療等。

參考文獻(xiàn)

[1]FatehullahA, TanSH, BarkerN．Organoids as an in vitro model of human development and disease[J]．Nature Cell Biol，2016，18(3)：246-254.

[2]Sachs N , Ligt J D , Kopper O , et al. A Living Biobank of Breast Cancer Organoids Captures Disease Heterogeneity[J]. Cell, 2018, 172(1-2):373.

[3]DekkersJF, WhittleJR, VaillantF，et al.Modeling breast cancer using CRISPR-CAS9-mediated engineering of human breast organoids[J]．J Natl Cancer Inst，2020，112(5):540-544.

[4]Dekkers JF, et al. Long-term culture, genetic manipulation and xenotransplantation of human normal and breast cancer organoids[J]. Nat Protoc. 2021 Apr;16(4):1936-1965.

[5] Zhuolong Zhou,?Kevin Van der Jeught,et al.An organoid-based screen for epigenetic inhibitors that stimulate antigen presentation and potentiate T-cell-mediated cytotoxicity[J]．Nat Biomed Eng.?2021 Nov;5(11):1320-1335.

[6]Runjie Song，?Peilan Guo，et al.A novel polypeptide CAPG-171aa encoded by circCAPG plays a critical role in triple-negative breast cancer[J].Mol Cancer.?2023 Jul 5;22(1):104.

伯楨生物成立于2021年3月，2022年9月完成集團(tuán)重組，總部立足蘇州工業(yè)園區(qū)。致力提供類器官標(biāo)準(zhǔn)化產(chǎn)品和一體化技術(shù)服務(wù)，覆蓋基礎(chǔ)研究、精準(zhǔn)醫(yī)療、藥物研發(fā)三大細(xì)分應(yīng)用場景。公司創(chuàng)始團(tuán)隊(duì)深耕類器官行業(yè)底層技術(shù)創(chuàng)新，先后搭建全球首例人源類器官新冠感染模型、母細(xì)胞瘤發(fā)生模型等多疾病模型與新藥研發(fā)平臺(tái)，國際首臺(tái)首制類器官全自動(dòng)建庫與高通量藥物發(fā)現(xiàn)平臺(tái)，及基于組織及腫瘤微環(huán)境解析的創(chuàng)新類器官模型構(gòu)建平臺(tái)。擁有覆蓋多譜系、多癌種類器官的全鏈條試劑、試劑盒產(chǎn)品，及全流程CDMO、CRO技術(shù)服務(wù)。伯楨生物秉承“引領(lǐng)醫(yī)藥創(chuàng)新，共享模型價(jià)值”的愿景，以國際一流的研發(fā)科技人才為核心，以“全球領(lǐng)先類器官模型平臺(tái)”為使命，堅(jiān)持優(yōu)質(zhì)和高效的服務(wù)，切實(shí)提升客戶新藥研發(fā)效率和基礎(chǔ)研究能力，讓好藥更早惠及大眾。

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