Co-IP分析蛋白互作的優(yōu)缺點(diǎn)
免疫共沉淀Co-IP(Co-Immunoprecipitation)是經(jīng)典的蛋白質(zhì)相互作用研究技術(shù),其以抗原抗體發(fā)生特異性的免疫反應(yīng)為基礎(chǔ)來研究細(xì)胞裂解液或蛋白混合物中的已知或未知蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間相互作用。Co-IP技術(shù)在研究蛋白相互作用中具有一定優(yōu)勢,當(dāng)然也存在一些缺點(diǎn)或局限。?
Co-IP技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)?
(1)蛋白質(zhì)以較穩(wěn)定的翻譯后修飾的天然狀態(tài)存在;?
(2)所檢測的產(chǎn)物為蛋白粗提取物;?
(3) 使用非變性劑裂解細(xì)胞,完整細(xì)胞內(nèi)存在的蛋白質(zhì)相互作用被最大限度的保留了下來;(4)所檢測蛋白質(zhì)相互作用是在天然狀態(tài)下形成的,避免了人為影響。?
Co-IP技術(shù)的缺點(diǎn)?
(1)不能保證所檢測的蛋白復(fù)合物為直接相互作用的兩種蛋白,可能有第三種蛋白起到橋梁作用;?
(2)對瞬時作用和低親和力的蛋白質(zhì)相互作用無能為力;?
(3)容易出現(xiàn)假陽性反應(yīng),靈敏度不高;?
(4)抗體的選擇很大程度上決定了實(shí)驗(yàn)的成敗,必須在實(shí)驗(yàn)前預(yù)測目的蛋白,并據(jù)此選擇相對應(yīng)的抗體,若預(yù)測失敗,實(shí)驗(yàn)就得不到結(jié)果。?
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