NCI-H1563細(xì)胞株是一種已知的胚肺細(xì)胞株，是肺癌細(xì)胞株在研究中的重要代表之一。無血清培養(yǎng)條件可以減少培養(yǎng)液中的不必要成分，避免病毒和細(xì)胞因子的污染，從而提高細(xì)胞的純度和穩(wěn)定性。同時，無血清培養(yǎng)條件也可簡化傳統(tǒng)細(xì)胞培養(yǎng)的工藝流程，減少對動物的使用，降低研究成本。在本文中，我們將介紹NCI-H1563胚肺細(xì)胞株的無血清培養(yǎng)條件優(yōu)化和細(xì)胞增殖機(jī)制研究。

方法

1. 優(yōu)化無血清培養(yǎng)條件

我們首先通過篩選不同的細(xì)胞培養(yǎng)基（RPMI 1640、DMEM和X-VIVO 10）以及不同濃度（2-10 %）的牛血清（FBS）和人血清（HS）。評價它們對細(xì)胞增殖、黏附和存活的影響。使用MTT法和Trypan藍(lán)染色方法評價細(xì)胞的增殖和存活能力。最優(yōu)條件下，采用Rh227（5 μM）熒光染色和DapI染色（0.5 μg/mL）評估細(xì)胞的形態(tài)和核型。

2. 分析細(xì)胞增殖機(jī)制

在細(xì)胞無血清培養(yǎng)條件下，通過Western blot法和qPCR法探究細(xì)胞周期相關(guān)基因和增殖相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。利用細(xì)胞停滯技術(shù)維持NCI-H1563在G0期，評估P21、P27、CDK1和CDK2底物酶的活性。利用流式細(xì)胞術(shù)技術(shù)（FACS）分析細(xì)胞周期的變化。

結(jié)果

1. 優(yōu)化無血清培養(yǎng)條件

經(jīng)過多次篩選和比較，我們發(fā)現(xiàn)X-VIVO 10培養(yǎng)基和5% HS的條件下，NCI-H1563胚肺細(xì)胞株的細(xì)胞黏附和增殖情況最佳。在該條件下，細(xì)胞呈現(xiàn)出纖細(xì)的形態(tài)，基本無污染，細(xì)胞數(shù)量呈現(xiàn)增長趨勢。同時，細(xì)胞也表現(xiàn)出了正常的核型和染色體形態(tài)。

2. 分析細(xì)胞增殖機(jī)制

我們發(fā)現(xiàn)，在無血清培養(yǎng)條件下，NCI-H1563細(xì)胞株的細(xì)胞周期受到抑制，G0/G1期的細(xì)胞數(shù)量增加，S期和G2/M期的細(xì)胞數(shù)量減少。相關(guān)的細(xì)胞周期蛋白CDK1和CDK2的表達(dá)也受到相應(yīng)調(diào)節(jié)，P21蛋白的表達(dá)量增加，P27蛋白的表達(dá)量則減少。這些結(jié)果提示，細(xì)胞周期受到了一定的干擾，造成細(xì)胞數(shù)量和增殖程度的下降。

結(jié)論

通過優(yōu)化無血清培養(yǎng)條件，我們找到了適合NCI-H1563胚肺細(xì)胞株生長的最佳條件。而在細(xì)胞增殖機(jī)制方面，我們發(fā)現(xiàn)無血清培養(yǎng)條件下，細(xì)胞周期發(fā)生了干擾，從而導(dǎo)致細(xì)胞增殖程度的下降。具體來說，該細(xì)胞株在無血清培養(yǎng)條件下，G0/G1期的細(xì)胞數(shù)量增加，S期和G2/M期的細(xì)胞數(shù)量減少。細(xì)胞周期控制蛋白CDK1和CDK2以及P21、P27蛋白的表達(dá)量也發(fā)生了改變。我們的研究為NCI-H1563胚肺細(xì)胞株的無血清培養(yǎng)和細(xì)胞增殖機(jī)制研究提供了一些基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和參考，并有助于深入研究肺癌的病因和治療。