XL01126 是一種強(qiáng)效的 LRRK2 降解劑，DC50 分別為 14 nM （G2019S LRRK2） 和 32 nM （WT LRRK2）。XL01126 可透過(guò)血腦屏障，并作為降解探針，用于帕金森疾病的研究。XL01126 能在 LRRK2 的非催化和框架功能的研究中發(fā)揮作用。

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　　為大家推薦一篇發(fā)表在J. Am. Chem. Soc.上的文章，文章的通訊作者是來(lái)自英國(guó)鄧迪大學(xué)的Alessio Ciulli和Dario R. Alessi，前者做的是靶向蛋白降解方面的研究，后者做的是LRRK2信號(hào)通路相關(guān)的研究。XL01126抑制劑:https://www.activeinhibitor.com/yzj/1132.html

　　首先，作者以一種可穿透血腦屏障的抑制劑HG-10-012-01為L(zhǎng)RRK2原型配體，E3配體部分則選擇了CRBN、cIAP和VHL的配體，將兩部分通過(guò)linker連接后構(gòu)建了第一代化合物庫(kù)。通過(guò)WB檢測(cè)LRRK2及其底物Rab10的Thr73磷酸化水平來(lái)評(píng)估抑制效果，作者初步篩選出了3種具有較好抑制作用的分子，發(fā)現(xiàn)它們的E3配體部分都是VHL配體。于是，作者以LRRK2配體、VHL配體和linker這3個(gè)模塊為基礎(chǔ)進(jìn)行衍生與組合，得到了第二代化合物庫(kù)。在針對(duì)第二代化合物庫(kù)的篩選中，作者發(fā)現(xiàn)了2種活性非常高的化合物XL01126和XL01134，它們?cè)?3 nM下處理24 h就可以實(shí)現(xiàn)對(duì)LRRK2超過(guò)50%的降解，而時(shí)間依賴性降解實(shí)驗(yàn)又顯示XL01126具有更快的降解速率。因此，作者確定了XL01126為最終的PROTAC分子。

　　對(duì)于PROTAC分子而言，該分子與靶蛋白和E3連接酶間三元復(fù)合的親和力、協(xié)同性和穩(wěn)定性是至關(guān)重要的。作者設(shè)計(jì)了一個(gè)BRET實(shí)驗(yàn)來(lái)表征各PROTAC分子誘導(dǎo)三元復(fù)合物的形成，結(jié)果表明XL01126擁有最高的復(fù)合物誘導(dǎo)能力，其協(xié)同性顯著大于XL01134。隨后，為了驗(yàn)證該分子的靶向性，作者對(duì)XL01126處理的細(xì)胞進(jìn)行了全蛋白質(zhì)組的定量分析，發(fā)現(xiàn)除了XL01126外還有一個(gè)脫靶蛋白PDE6D，作者根據(jù)已有的PDE6D的PROTAC分子推測(cè)XL01126與其warhead的相似性可能是導(dǎo)致脫靶效應(yīng)產(chǎn)生的原因。

　　生物活性

　　體外研究

　　XL01126 （300 nM;4 h）通過(guò)與E3泛素連接酶配體VHL和靶蛋白LRRK2形成正合作三元配合物，表現(xiàn)出較強(qiáng)的降解性能。

　　XL01126 （10,30,100 nM;24 h）增加永生化小鼠胚胎成纖維細(xì)胞的自噬。

　　Xl01126 （10 μm;90分鐘）Caco-2細(xì)胞顯示高通透性。

　　Xl01126 （10 μm;0-60最??；每15分鐘間隔梯度）在小鼠血漿、肝微粒體和肝細(xì)胞中表現(xiàn)出很高的穩(wěn)定性。Xl01126:https://www.medchemexpress.cn/xl01126.html

　　XL01126體外藥動(dòng)學(xué)

　　MCE尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性。僅供參考。

　　Western Blot分析

　　細(xì)胞系：g2019s LRRK2 MEFs（小鼠胚胎成纖維細(xì)胞）

　　濃度：300 nM

　　潛伏期：4小時(shí)

　　結(jié)果：LRRK2 pSer935、Rab10 pThr73降低。