1 ?方法概述：

本測(cè)試方法采用沉降法，即通過(guò)自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若干時(shí)間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見(jiàn)的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來(lái)判定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來(lái)評(píng)定潔凈室（區(qū)）的潔凈度。

2??所用的儀器和設(shè)備

2.1 ?高壓消毒鍋使用時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照儀器說(shuō)明書操作。

2.2 ?恒溫培養(yǎng)箱必須定期對(duì)培養(yǎng)箱的溫度進(jìn)行校驗(yàn)。

2.3 ?培養(yǎng)皿一般采用Ф90mm×15mm 的硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿。

2.4? 普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基的準(zhǔn)備及滅菌見(jiàn)附件A

3??測(cè)試步驟

3.1??采樣方法：將已制備好的培養(yǎng)皿，按潔凈室沉降菌采樣點(diǎn)布置圖的要求放置，打開(kāi)培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基面暴露30分鐘（靜態(tài)），再將培養(yǎng)皿蓋蓋上后倒置。

3.2??培養(yǎng)
???3.2.1 ?全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
???3.2.2 ?在30℃-35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時(shí)間不少于48h。
???3.2.3 ?每批培養(yǎng)基應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn)，檢驗(yàn)培養(yǎng)基本身是否污染?？擅颗x定3只培養(yǎng)皿作對(duì)照培養(yǎng)。

3.3??菌落計(jì)數(shù)
???3.3.1 ?用肉眼直接計(jì)數(shù)，標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)計(jì)，然后用5-10倍放大鏡檢查，看是否有遺漏。
???3.3.2 ?若培養(yǎng)皿上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。

4??注意事項(xiàng)

4.1 ?測(cè)試用具要作滅菌處理，以確保測(cè)試的可靠性，準(zhǔn)確性。

4.2 ?采取一切措施防止人為對(duì)樣本的污染。

4.3 ?對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)做詳細(xì)的記錄。

4.4 ?由于細(xì)菌種類繁多，差別甚大，計(jì)數(shù)時(shí)一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì)觀察，不要漏計(jì)培養(yǎng)皿邊緣生長(zhǎng)的菌落，并須注意細(xì)菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時(shí)用顯微鏡鑒別。

4.5 ?采樣前仔細(xì)檢查每個(gè)培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)，破損或污染的應(yīng)剔除。

5??測(cè)試規(guī)則

5.1 ?沉降菌檢測(cè)前，被檢測(cè)潔凈室（區(qū)）的溫濕度須達(dá)到規(guī)定的要求，靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速控制在規(guī)定值內(nèi)。
???5.1.2 ?沉降菌檢測(cè)前，被檢測(cè)潔凈室（區(qū)）已經(jīng)過(guò)消毒。
???5.1.3 ?測(cè)試狀態(tài)有靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種，測(cè)試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報(bào)告中注明測(cè)試狀態(tài)。

5.2??測(cè)試人員
???5.2.1 ?測(cè)試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級(jí)別的工作服。
???5.2.2 ?靜態(tài)測(cè)試時(shí)，室內(nèi)測(cè)試人員不得多于二人。

5.3??測(cè)試時(shí)間
???5.3.1 ?對(duì)單向流，測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)運(yùn)行不少于15min 后開(kāi)始。
???5.3.2 ?對(duì)非單向流，測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于30min后開(kāi)始。

5.4??沉降菌計(jì)數(shù)
???5.4.1??采樣點(diǎn)數(shù)目及其布置

最少采樣點(diǎn)數(shù)目如下表

在滿足最少測(cè)點(diǎn)數(shù)的同時(shí)，還宜滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)見(jiàn)下表

采樣點(diǎn)的布置
???工作區(qū)采樣點(diǎn)的位置離地0.8m-1.5m左右（略高于工作面）。
???可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加采樣點(diǎn)。采樣點(diǎn)位置的詳細(xì)規(guī)則見(jiàn)附件B。
???房間采樣點(diǎn)超過(guò)10個(gè)點(diǎn)，每7天對(duì)所有采樣點(diǎn)輪流監(jiān)測(cè)一次。

5.5??記錄：監(jiān)測(cè)記錄中應(yīng)記錄房間溫度、相對(duì)濕度、測(cè)試狀態(tài)。

5.6??結(jié)果計(jì)算
???5.6.1 ?用計(jì)數(shù)方法得出各個(gè)培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。
???5.6.2 ?平均菌落數(shù)的計(jì)算，見(jiàn)式（1）。

式中：
??????m 平均菌落數(shù)；
??????m1 1號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)；
??????m2 2號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)；
??????mn n號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)；
??????N ?培養(yǎng)皿總數(shù)。

5.7 ?結(jié)果評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)：

靜態(tài)：

注：表中各數(shù)值均為平均值。

5.7.1 ?潔凈室（區(qū)）內(nèi)的平均菌落數(shù)必須低于所選定的評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)。
5.7.2 ?若某潔凈室（區(qū)）內(nèi)的平均菌落數(shù)超過(guò)評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，則必須對(duì)此區(qū)域先進(jìn)行消毒，然后重新采樣兩次，測(cè)試結(jié)果均須合格。

6??附件

6.1 ?附件A：培養(yǎng)基的準(zhǔn)備及滅菌
? ??6.1.1??培養(yǎng)基的準(zhǔn)備：培養(yǎng)基應(yīng)購(gòu)買國(guó)家認(rèn)可的培養(yǎng)基。
? ??6.1.2??培養(yǎng)基平皿的制備

? ????6.1.2??6.1.2.1 ?將Ф90mm 的培養(yǎng)皿置于121℃濕熱滅菌20min或160℃干熱滅菌2h。
? ? ? 6.1.2??6.1.2.2 ?將培養(yǎng)基加熱熔化，冷至55℃時(shí)，在無(wú)菌操作要求下將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿，每皿約15mL。
? ? ? 6.1.2??6.1.2.3 ?待瓊脂凝固后，將培養(yǎng)基平皿倒置于30℃-35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h，若培養(yǎng)基平皿上確無(wú)菌落生長(zhǎng)，即可供采樣用。
? ? ? 6.1.2??6.1.2.4 ?注：制備好的培養(yǎng)基平皿宜在2℃-8℃的環(huán)境中存放。

6.2 ?附件B：采樣點(diǎn)布置
? ? ??潔凈區(qū)采樣點(diǎn)的布置力求均勻，避免采樣點(diǎn)在某局部區(qū)域過(guò)于集中，某局部區(qū)域過(guò)于稀疏。

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