按質(zhì)量計(jì)算，鎂是人體中含量第十一豐富的元素。Mg+2是對(duì)所有活細(xì)胞都至關(guān)重要，因?yàn)樗诖龠M(jìn)蛋白質(zhì)的加工方面起著重要作用生物多磷酸鹽，如ATP、DNA、RNA和酶的功能。Mg+2是金屬離子葉綠素中心的離子，一種常見的肥料添加劑。Mg+2化合物是用作瀉藥、抗酸劑，用于穩(wěn)定異常的神經(jīng)興奮和血液循環(huán)血管痙攣，即子癇。

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艾美捷?BioVision鎂比色檢測(cè)試劑盒提供了一種簡(jiǎn)單靈敏的方法定量檢測(cè)多種生物樣品中的鎂.本試劑盒基于甘油激酶對(duì)Mg2+需求的特異性.酶聯(lián)反應(yīng)的一種產(chǎn)物能顯出顏色（λmax = 450nm），該物質(zhì)的產(chǎn)量與Mg2+濃度成正比.檢測(cè)范圍為2-15 nmoles，檢測(cè)J限為40 M.

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鎂比色檢測(cè)試劑盒分析方案：

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1.標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)備：

通過添加10μl 150 nmol/μl鎂標(biāo)準(zhǔn)溶液，將標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋至1.5 nmol/μl至990μl蒸餾水，充分混合。將0,2,4,6,8,10μl添加到一系列孔中。調(diào)整體積為50μl/孔，用蒸餾水生成0,3,6,9,12,15 nmol/孔的鎂標(biāo)準(zhǔn)。

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2.樣品制備：組織或細(xì)胞可通過4體積的鎂分析提取緩沖液，旋轉(zhuǎn)16000g 10分鐘，以獲得清晰的提取物。向96孔中添加1-50μl液體樣品平板，用水使總體積達(dá)到50μl。正常血清含有Mg2+0.7-1.05 mM（1.65-2.55 mg/dL），使用5μl血清進(jìn)行檢測(cè)。尿液應(yīng)稀釋10倍。對(duì)于未知樣品，我們建議測(cè)試不同數(shù)量的取樣以確保OD在線性范圍內(nèi)。

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3.鎂反應(yīng)混合物：根據(jù)樣品數(shù)量和標(biāo)準(zhǔn)混合足夠的試劑待執(zhí)行：對(duì)于每個(gè)孔，制備總含量為50μl的反應(yīng)混合物，其中包含：35μl鎂分析緩沖液10μl顯影劑5μl鎂酶混合物

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4.將50μl反應(yīng)混合物添加到每個(gè)含有鎂標(biāo)準(zhǔn)和測(cè)試的孔中樣品。為了獲得zui佳結(jié)果，使用多通道移液器在所有樣品中同時(shí)啟動(dòng)反應(yīng)同時(shí)。拌勻。

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5.在37℃下培養(yǎng)10分鐘。讀取銘牌OD450nm，以獲得每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)或標(biāo)準(zhǔn)的A0樣品。

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注意：

1） 由于酶動(dòng)力學(xué)對(duì)溫度變化很敏感，因此反應(yīng)速率將隨著溫度的升高而增加。反應(yīng)大約需要10分鐘才能達(dá)到線性反應(yīng)速率。

2） 樣品中的NAD（P）H等可能會(huì)產(chǎn)生背景，10分鐘的等待時(shí)間可以糾正這些非特異性背景。

3）?Mn2+、Zn2+、Ni2+、Fe2+、Cu2+、Co2+、Ca2+不干擾測(cè)定。

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6.將反應(yīng)再培養(yǎng)10-30分鐘，再次讀取OD以獲得讀數(shù)A。建議監(jiān)測(cè)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)，以確保在以下情況下讀數(shù)在線性范圍內(nèi)：再多讀10-30分鐘。所有讀數(shù)不得超過1.5 OD。

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7.計(jì)算：從標(biāo)準(zhǔn)和樣品讀數(shù)中減去A0得到?OD=A-A0。情節(jié)鎂標(biāo)準(zhǔn)曲線。應(yīng)用樣本?OD到標(biāo)準(zhǔn)曲線，以獲得Mg2+量B（nmol）在反應(yīng)井中。Mg2+濃度：C=B/V（nmol/ml或μM）式中：B為反應(yīng)井中的Mg2+量（單位：nmol）。V是添加到反應(yīng)井中的樣品體積（ml）。鎂分子量：24.3 g/mol，1 mM=2.43 mg/dL。也可以通過監(jiān)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液中的反應(yīng)斜率來計(jì)算析樣品反應(yīng)。

鎂標(biāo)準(zhǔn)曲線：根據(jù)試劑盒方案進(jìn)行測(cè)定。垂直點(diǎn)線表示正常血清Mg2+濃度的下限和上限。