BRAF基因簡介

BRAF基因是一種重要的原癌基因，位于第7號染色體的長臂上（7q34），編碼B-RAF蛋白。BRAF蛋白是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，為RAF激酶家族中的一員。RAF激酶家族（ARAF、BRAF和CRAF）是RAS- RAF-MEK-ERK信號級聯(lián)（MAPK信號）的核心組成部分，可在整個細胞內(nèi)傳遞來自細胞外環(huán)境的信號提示，從而指導(dǎo)細胞增殖分化。MAPK信號傳導(dǎo)的異?；罨窃S多惡性腫瘤的標(biāo)志，最常由RAS和BRAF發(fā)生突變所致。

當(dāng)生長因子與細胞表面的受體結(jié)合后，受體的酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域被激活并通過RAS激酶發(fā)出信號。RAF蛋白是活化的RAS蛋白的直接效應(yīng)子，RAF分子的二聚化通過磷酸化和激活MEK進一步傳遞該信號級聯(lián)，磷酸化的MEK激活ERK，活化后的ERK從胞質(zhì)進入細胞核，磷酸化和活化核內(nèi)的效應(yīng)分子，最終啟動與細胞增殖有關(guān)的靶基因轉(zhuǎn)錄，促進細胞增殖、分化、遷移和存活。

BRAF基因?qū)τ谡＜毎纳L至關(guān)重要，但不受抑制的BRAF信號傳導(dǎo)會促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展。正常細胞中BRAF蛋白傳遞來自細胞膜的信號，BRAF蛋白通常只在需要傳遞信號時保持活性狀態(tài)。當(dāng)BRAF基因發(fā)生致癌突變時，BRAF蛋白處于持續(xù)激活狀態(tài)，干擾了細胞信號傳遞鏈的正常功能，引起細胞的異常。

BRAF基因突變臨床特征

1. 突變類型

目前，已有30多種不同的BRAF突變被發(fā)現(xiàn)，根據(jù)突變信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制和激酶活性可將BRAF突變分為3類，分別是V600突變激酶激活單體（Ⅰ類）、激酶激活性二聚體（Ⅱ類）和激酶失活性異源二聚體（Ⅲ類）（圖2）。三種突變類型的激酶活性和對靶向抑制劑的反應(yīng)均存在差異，應(yīng)選擇不同的治療方案。

2. 突變頻率

BRAF基因最常見的突變是V600突變，BRAF V600突變發(fā)生于多種腫瘤中：在黑色素瘤中發(fā)生率為40-50%，甲狀腺癌中發(fā)生率為10-70%（取決于組織學(xué)類型），結(jié)直腸癌中發(fā)生率為10%，非小細胞肺癌中發(fā)生率為3-5%。在乳腺癌、胃癌、膽管癌、卵巢癌、胰腺癌和一些罕見病（如朗格漢斯細胞組織細胞增生癥和脂質(zhì)肉芽腫?。┲?，同樣存在BRAF突變。

BRAF基因突變在多種腫瘤中均可檢出，存在多癌種共發(fā)的廣譜致癌性，其中在惡性黑色素瘤（50~60%）、甲狀腺癌（30~50%）、結(jié)直腸癌（10%）、肺癌（3%）和毛細胞白血病（100%）中較為常見。

?黑色素瘤?

在黑色素瘤患者中，BRAF基因突變比例占50~60%左右，其中V600E突變常見于年輕患者，V600K則多見于老年患者。北京大學(xué)腫瘤醫(yī)院一項分析了432例黑色素瘤患者的研究發(fā)現(xiàn)，中國黑色素瘤患者發(fā)生BRAF 突變的頻率為25.5%，其中V600E的突變率為89.1%，慢性日光損傷型、非慢性日光損傷型、肢端型、黏膜型及原發(fā)灶不明的黑色素瘤患者BRAF V600突變頻率分別為18.2%、57.1%、15.5%、12.5%和27.3%。與野生型黑色素瘤相比，BRAF突變黑色素瘤與更差的臨床預(yù)后相關(guān)，且腦轉(zhuǎn)移和肝轉(zhuǎn)移風(fēng)險顯著高于BRAF野生型患者。

肺 癌?

BRAF基因突變是非小細胞肺癌（NSCLC）中重要的驅(qū)動基因，突變頻率約為2~4%。NSCLC中BRAF的突變位點主要分布于11及15號外顯子，約占BRAF突變的50%。一項研究納入236例發(fā)生BRAF突變的NSCLC患者，其中I類人群約占45%（107例），II類人群占32%（75例），III類人群占23%（54例）。本研究中BRAF突變多達25種類型，86%患者突變位點集中于以下類型：V600（45%），G469（22%），G466（11%），D594（8%）。研究結(jié)果提示II/III類NSCLC患者可能較I類患者預(yù)后更差。

?結(jié)直腸癌?

BRAF V600E突變在結(jié)直腸癌中的突變頻率約為5~12%，是結(jié)直腸癌中BRAF經(jīng)常發(fā)生的突變，為結(jié)直腸癌預(yù)后不良的因素之一。這一突變使BRAF激酶活性比野生型增強130~700倍，引起MAPK通路自發(fā)持續(xù)異常激活，從而導(dǎo)致結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展以及對EGFR單抗如西妥昔單抗、帕尼單抗的耐藥。BRAF V600E突變型結(jié)直腸癌多見于右半結(jié)腸（81%），且MSI-H比例更高（30%），好發(fā)于女性（65%），幾乎不與KRAS突變同時發(fā)生。CSCO指南推薦結(jié)直腸癌患者行靶向治療前，應(yīng)檢測BRAF V600E突變和RAS突變狀態(tài)。

Mayo clinic的一項多中心回顧性隊列研究顯示，結(jié)直腸癌患者中，發(fā)生BRAF non-V600E突變的頻率為2.2%（208/9643），占所有BRAF突變患者的21%（208/965）。BRAF non-V600E突變多發(fā)于左半結(jié)腸（63%），常見于男性（54%），多為MSS（94%），且與KRAS突變可以同時存在（26%）。對比BRAF V600E突變及BRAF野生型的晚期結(jié)直腸癌患者，攜帶BRAF non-V600E突變患者的中位生存期（OS）顯著延長（11.4個月 vs. 43.0個月 vs. 60.7個月，P <0.001），多因素分析結(jié)果顯示BRAF non-V600E突變是結(jié)直腸癌預(yù)后更好的獨立預(yù)測因子。

BRAF基因突變檢測方法

BRAF基因突變已成為多種腫瘤臨床診治必需的檢測項目，可以選擇實時熒光定量PCR（Q-PCR）?和下一代測序?(NGS)方法。

RT-PCR檢測具有靈敏性高、特異性強、簡便快速的特點。

NGS又稱高通量測序，廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中腫瘤的預(yù)防、檢測及治療，能夠檢測錯義點突變、易位、反轉(zhuǎn)、插入和缺失、拷貝數(shù)變異等。NGS可以一個平臺一份樣本即可得到多個基因檢測結(jié)果，大大節(jié)省了時間和樣本。

BRAF基因標(biāo)準(zhǔn)品現(xiàn)貨與基因突變標(biāo)準(zhǔn)品細胞株定制

BRAF基因標(biāo)準(zhǔn)品現(xiàn)貨：

NGS腫瘤多基因檢測試劑盒適用于檢測患者腫瘤組織中與靶向治療密切相關(guān)的多個基因的突變狀態(tài)，依次篩選出適合接受靶向藥物治療的患者，突破傳統(tǒng)檢測一份標(biāo)本只能做一次檢測的局限，減輕患者經(jīng)濟負擔(dān)，實現(xiàn)精細化精準(zhǔn)醫(yī)療。

海星生物成熟的基因編輯系統(tǒng)：CRISPR/Cas9基因定點編輯技術(shù)、VIRUS-Free? 基因穩(wěn)轉(zhuǎn)技術(shù)、ClonePlus?細胞單克隆三大核心技術(shù)，可以輕松實現(xiàn)：多基因、高頻率、穩(wěn)定傳代的突變標(biāo)準(zhǔn)品細胞株構(gòu)建，有效解決多基因多細胞系混合突變頻率不確定的難題。

基因突變(Mutation)標(biāo)準(zhǔn)品細胞株定制

優(yōu)勢：可以指定任何突變區(qū)域、任何變異類型（SNV、Indel）；可以實現(xiàn)：多基因、高頻率、穩(wěn)定傳代的腫瘤突變標(biāo)準(zhǔn)品細胞株構(gòu)建，有效解決多基因多細胞系混合突變頻率不確定的難題。

周期：7~12~18周

變異頻率：100%；或>50%(注：不同技術(shù)路線，變異頻率略有差異)

交付成果：穩(wěn)定傳代細胞株；同時可提供背景細胞株（野生型細胞株）；

交付形式：細胞株、gDNA、ctDNA、FFPE蠟塊

驗證方法：PCR檢測、Sanger測序驗證

可選：qPCR確認拷貝數(shù)或數(shù)字PCR確認拷貝數(shù)或其它檢測方法

適用：NGS、qPCR、數(shù)字PCR等平臺性能評估

以上內(nèi)容由海星生物提供?

我們的服務(wù)：CRISPR/Cas9細胞基因編輯、載體構(gòu)建/病毒包裝、分子診斷標(biāo)準(zhǔn)品/突變基因標(biāo)準(zhǔn)品/融合基因標(biāo)準(zhǔn)品、細胞穩(wěn)轉(zhuǎn)/細胞干擾

我們的產(chǎn)品：HyCyte干細胞/原代細胞/細胞株、三系誘導(dǎo)培養(yǎng)試劑、ClonePlus 專用培養(yǎng)基、基因編輯試盒、病毒現(xiàn)貨、細胞專用血清