Worthington膠原蛋白酶的特點(diǎn)和用途
艾美捷Worthington膠原蛋白酶原料認(rèn)證:
粗膠原酶制劑含有兩種不同膠原酶的幾種同工型,一種巰基蛋白酶、梭菌蛋白酶、一種胰蛋白酶樣酶和一種氨肽酶。這種膠原蛋白水解和蛋白水解活性的組合可有效分解細(xì)胞間基質(zhì),這是組織解離的重要部分。該復(fù)合物的一個(gè)成分是水解酶,它優(yōu)先在序列?Pro-Y-Gly-Pro?中的?Y-Gly?鍵處降解天然膠原蛋白中的螺旋區(qū)域,其中?Y?最常見的是中性氨基酸。這種切割產(chǎn)生對進(jìn)一步肽酶消化敏感的產(chǎn)物。粗膠原酶被半胱氨酸、EDTA?或鄰菲咯啉等金屬螯合劑抑制,但?DFP?不抑制。它也被一種大的血漿糖蛋白α2-巨球蛋白抑制。鈣2+是酶活性所必需的。每種膠原酶的特定酶譜已與從中獲得研究細(xì)胞的組織(或與放置細(xì)胞的用途)相關(guān),并且作為相關(guān)性的結(jié)果,Worthington?已經(jīng)建立了幾種類型的粗膠原酶:類型?1、2、3?和?4。
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??1?型粗膠原酶具有膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶和胰蛋白酶活性的原始平衡。
??2?型含有較高相對水平的蛋白酶活性,尤其是梭菌蛋白酶。
??3?型含有最低水平的二級蛋白酶。
??4?型被設(shè)計(jì)成胰蛋白酶活性特別低,以限制對膜蛋白和受體的損害。
??5?型 含有較高的膠原酶和酪蛋白酶值。
??6?型 含有高膠原酶活性,酪蛋白酶與膠原酶的比例約為?2:1。設(shè)計(jì)為相對于?I?型?( col ?G)富含?II?型?( col ?H)?膠原酶。
??7?型膠原酶和酪蛋白酶的活性比?1?型和?2?型膠原酶高四倍。
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艾美捷Worthington無動物型?AFA、AFB?和?AFC、STZ1?和?STZ2膠原蛋白酶源自在完全不含動物成分的培養(yǎng)基中生長的培養(yǎng)物,設(shè)計(jì)用于必須防止引入潛在動物源性病原體的生物加工應(yīng)用。二級蛋白酶的水平與?1?型和?2?型膠原酶相似。
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? ?CLSAFA?是最初的?AFA?等級,旨在含有類似于?1?型和?2?型膠原酶的膠原酶和二級蛋白酶。
? ?CLSAFB?含有比?CLSAFA?更高的膠原酶和酪蛋白酶活性。
? ?CLSAFC?具有特別低的胰蛋白酶活性,類似于?4?型膠原酶。
? ?STZ1?和?STZ2,0.22μ 過濾的?STEMxyme ? AOF?膠原酶/中性蛋白酶?(Dispase?)?混合物,用于原代細(xì)胞和干細(xì)胞分離。
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膠原蛋白酶測定是Mandl的改進(jìn),其中將膠原酶與天然膠原一起溫育5小時(shí),并使用Moore and Stein, JBC, 176 , 367, (1948)比色茚三酮法測定膠原分解的程度。釋放的氨基酸以每毫克膠原酶微摩爾亮氨酸表示。
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艾美捷Worthington膠原蛋白酶用途:
粗膠原酶廣泛用于酶促原代細(xì)胞分離和組織解離程序。大多數(shù)研究人員要么使用粗制膠原酶制劑,例如?1、2、3?和?4?型,要么使用色譜純化的膠原酶(代碼:CLSPA);后者通常與二級酶如彈性蛋白酶、透明質(zhì)酸酶等結(jié)合。為了獲得最佳結(jié)果,必須針對要解離的組織調(diào)整蛋白水解活性的較精確混合。不同組織的類型和有效性之間的相關(guān)性很好,但并不完美,并且可能部分取決于使用參數(shù)和目標(biāo)以及批次間的差異。