在之前的文章里，小編與大家分享了一些“菌落計(jì)數(shù)”國家標(biāo)準(zhǔn)解讀等。如果要嚴(yán)謹(jǐn)?shù)貙?shí)現(xiàn)計(jì)數(shù)操作，需要按照規(guī)范的步驟來進(jìn)行。今天，小編就與大家一起來了解一下菌落計(jì)數(shù)的具體步驟吧。

樣品的稀釋

固體和半固體樣品：稱取25 g置盛有 225mL磷酸鹽緩沖液 或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000 r/min～10000 r/min均質(zhì)1min～2 min，或放入盛有225 mL稀釋液的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min～2 min，制成1:10的樣品勻液。

液體樣品：以無菌吸管吸取25 mL樣品置盛有225 mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成1:10的樣品勻液。

上步完成后，用1 mL無菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1 mL，沿管壁緩慢注于盛有9 mL稀釋液的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1支無菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成1:100的樣品勻液。

樣品勻液完成后，可按相同操作，制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1次1 mL無菌吸管或吸頭。

根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì)，選擇2個(gè)～3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進(jìn)行10倍遞增稀釋時(shí)，吸取1 mL樣品勻液于無菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。同時(shí)，分別吸取1 mL空白稀釋液加入兩個(gè)無菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照。

之后，及時(shí)將15 mL～20 mL冷卻至46℃的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基（可放置于46 ℃±1 ℃恒溫水浴箱中保溫）傾注平皿，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻。

培養(yǎng)和計(jì)數(shù)

樣品稀釋完成后，就要進(jìn)行培養(yǎng)和菌落計(jì)數(shù)了

待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，36 ℃±1 ℃培養(yǎng)48 h±2h。水產(chǎn)品30 ℃±1 ℃培養(yǎng)72h±3 h。

如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長的菌落時(shí)，可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基 （約4mL），凝固后翻轉(zhuǎn)平板，按相同條件進(jìn)行培養(yǎng)。

培養(yǎng)完成后，就要進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)了，計(jì)數(shù)可用肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡或菌落計(jì)數(shù)器，記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。菌落計(jì)數(shù)以菌落形成單位（colony-forming units, CFU）表示。

選取菌落數(shù)在30 CFU～300 CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)。低于30 CFU的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300 CFU的可記錄為多不可計(jì)。每個(gè)稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù)。

結(jié)果與報(bào)告

為了生成結(jié)果和報(bào)告，需要根據(jù)計(jì)數(shù)結(jié)果和公式計(jì)算出菌落總數(shù)。需要注意的是，對(duì)于菌落數(shù)量不同的培養(yǎng)皿，計(jì)數(shù)原則有所不同。?

若所有平板上為蔓延菌落而無法計(jì)數(shù)，則報(bào)告菌落蔓延。若空白對(duì)照上有菌落生長，則此次檢測結(jié)果無效。

稱重取樣以CFU/g為單位報(bào)告，體積取樣以CFU/mL為單位報(bào)告。

來源：“食品微生物檢測”公眾號(hào)，作者~。
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