一、?百螢 Cell Meter Caspase 8活性細胞凋亡檢測試劑盒 概述

Cell Meter Caspase 8活性細胞凋亡檢測試劑盒是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于細胞凋亡的試劑盒，Cell Meter Caspase 8活性細胞凋亡檢測試劑盒是通過測量Caspase 8的活性而用于細胞凋亡檢測的。Caspase 8 是一種Caspase蛋白，CASP8基因所編碼。在神經(jīng)元變性疾病中，例如亨廷頓綜合癥，caspase 8扮演著重要角色。Caspase 8已被證明具有底物選擇性，其肽基序為Ile-Glu-Thr-Asp (IETD)。該試劑盒使用(Ac-IETD)2-R110作為熒光指示器來檢測caspas-8的活性。通過caspas-8的切割R110肽產(chǎn)生強綠色熒光，其發(fā)射光在520 nm和530 nm之間，激發(fā)光為480 nm和500 nm之間。這種特性使得試劑盒能適合于FITC濾光器。本試劑盒提供所有必需組分和操作流程。該實驗結(jié)果穩(wěn)定，快速且適應高通量篩選。它不僅能夠定量凋亡細胞中caspas-8的活性還能篩選caspas-8的抑制劑。

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二、?百螢 Cell Meter Caspase 8活性細胞凋亡檢測試劑盒適用儀器

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熒光酶標儀

Ex:? ? ? ? ? ??? ?490nm

Em:? ? ? ? ? ? ?525nm

Cutoff:? ? ? ? ?515nm

推薦孔板: ???黑色透明底板

讀取模式: ???頂/底讀模式

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三、百螢 Cell Meter Caspase 8活性細胞凋亡檢測試劑盒實驗方案

簡要概述

1.用測試化合物（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）制備細胞
2.加入等體積的Caspase 8工作溶液（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）
3.在室溫下孵育30分鐘至1小時
4.監(jiān)測Ex / Em = 490/525 nm處的熒光增加（截止= 515 nm）

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工作溶液配制

將50μLCaspase8底物（組分A）加入10mL測定緩沖液（組分B）中并充分混合以制備Caspase 8工作溶液。 避光。 注意：Caspasae 8工作液不穩(wěn)定，請及時使用。?

操作步驟

1.通過將10μL/孔的10X測試化合物（96孔板）或5μL/孔的5X測試化合物（384孔板）加入PBS或所需緩沖液中來處理細胞。對于空白孔（沒有細胞的培養(yǎng)基），加入相同量的化合物緩沖液。

2.將細胞板在5％CO 2,37℃培養(yǎng)箱中孵育所需的一段時間（對于用喜樹堿或星形孢菌素處理的Jurkat細胞，4-6小時）以誘導細胞凋亡。

3.加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Caspase 8工作溶液。

4.將板在室溫下孵育30分鐘至1小時，避光。注意：如果需要，在室溫下加入Caspase 8工作溶液10分鐘前，向選定的樣品中加入1μL的1 mM Ac-IETD-CHO caspase 8抑制劑，以確認對caspase 8樣活性的抑制作用。

5.以800rpm離心細胞板（特別是對于非貼壁細胞）2分鐘（制動關閉）。

6.用熒光酶標儀在Ex / Em = 490 / 525nm（截止= 515nm）下監(jiān)測熒光增加。

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數(shù)據(jù)分析

四、參考文獻

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