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細(xì)胞療法|這些免疫細(xì)胞你都了解嗎?又該如何實現(xiàn)高活性高純度制備?

2023-08-08 14:29 作者:賽業(yè)生物  | 我要投稿

前幾天,小賽在后臺收到了讀者提問:“想了解T細(xì)胞在體外的培養(yǎng)周期是多久?”在此我們也一并把答案分享給大家——原代T細(xì)胞一般在體外的培養(yǎng)時間不超過三周,用于功能實驗的T細(xì)胞建議培養(yǎng)時間在14天以內(nèi)。


高活性高純度的免疫細(xì)胞制備是細(xì)胞研究治療的關(guān)鍵要素,因此,在細(xì)胞構(gòu)建及培養(yǎng)過程中我們需要了解多方面的問題。賽業(yè)生物基于多年的免疫細(xì)胞制備經(jīng)驗,可為客戶提供包括T及CAR-T細(xì)胞、NK及CAR-NK細(xì)胞、通用型CAR-T細(xì)胞、鼠源CAR-T細(xì)胞在內(nèi)的多種免疫細(xì)胞制備服務(wù)。我們擁有:


高純度、高活性的T/NK細(xì)胞制備工藝

高陽性率的CAR-T/NK細(xì)胞制備工藝

◆高純度、高活性、高陽性率的UCAR-T細(xì)胞制備工藝

◆嚴(yán)格的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)



不僅如此,我們能給予你關(guān)于CAR-T/其他細(xì)胞治療研發(fā)的全方位支持,從抗體開發(fā)、CAR病毒制備、免疫細(xì)胞制備和表型檢測,到細(xì)胞模型與動物模型的構(gòu)建、體外/體內(nèi)藥效評價一應(yīng)俱全,歡迎聯(lián)系我們詳談。




T/CAR-T細(xì)胞制備

T細(xì)胞是機(jī)體中較重要的適應(yīng)性免疫細(xì)胞之一,基于嵌合抗原受體的T細(xì)胞(CAR-T)目前在腫瘤治療領(lǐng)域已取得諸多突破。賽業(yè)生物擁有豐富的T細(xì)胞制備經(jīng)驗,能夠通過多種方法制備高純度的T細(xì)胞,不同的制備方法可獲得不同占比的CD4和CD8 T亞型細(xì)胞。我們還可提供定制化的CAR-T細(xì)胞制備服務(wù),并且能夠保證所制備CAR-T細(xì)胞的抗腫瘤功能。


●?CD19 CAR-T細(xì)胞制備

圖1 兩種方法擴(kuò)增的T細(xì)胞表型檢測



圖2 CD19 CAR-T細(xì)胞陽性率檢測



●?GPC3 CAR-T細(xì)胞制備

圖3 GPC3 CAR-T細(xì)胞陽性率檢測



UCAR-T細(xì)胞制備

目前上市的CAR-T細(xì)胞藥物均為個體化的治療產(chǎn)品,其制備成本高、周期長、制備失敗風(fēng)險性高、價格昂貴、難以實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化。因此,近年來通用型CAR-T細(xì)胞治療的研究也越來越受到重視。T細(xì)胞用于異體治療的障礙在于,其回輸后會造成嚴(yán)重的移植物抗宿主反應(yīng)(即GvHD)?,F(xiàn)有的研究表明,TCR受體復(fù)合物是介導(dǎo)GvHD發(fā)生的重要分子,TCR復(fù)合物表達(dá)被阻斷的T細(xì)胞用于異體治療不會引起GvHD等毒副作用?;贑RISPR/Cas9技術(shù),賽業(yè)生物建立了有效的TCRα以及CD52敲除工藝,結(jié)合慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù),能夠制備高純度、CAR分子高表達(dá)的通用型CAR-T細(xì)胞,可滿足不同靶點研究所需要的通用型CAR-T細(xì)胞的制備。


●?GPC3 UCAR-T細(xì)胞制備

圖4 T細(xì)胞TCRα和CD52基因敲除細(xì)胞效率檢測



圖5 TCRα和CD52敲除細(xì)胞富集效率檢測



圖6 GPC3 UCAR-T細(xì)胞陽性率檢測



NK/CAR-NK細(xì)胞制備

NK細(xì)胞是一重要的固有免疫細(xì)胞,在抗病毒感染、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)方面具有重要作用。NK細(xì)胞不需要免疫預(yù)活化便可發(fā)揮免疫功能,可先于適應(yīng)性免疫細(xì)胞發(fā)揮作用,且其抗腫瘤活性的發(fā)揮也不受MHC分子限制。因此,NK細(xì)胞可用于異體免疫治療,其異體回輸?shù)陌踩砸苍诙鄠€臨床實驗中被證實。賽業(yè)生物目前已建立了高純度、高活性的NK細(xì)胞和CAR-NK細(xì)胞治療方法,可滿足研究人員在NK細(xì)胞免疫治療以及抗體藥物ADCC研究等方面的需求。


●?GPC3 CAR-NK細(xì)胞制備

圖7 兩種NK細(xì)胞擴(kuò)增方法NK細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù)統(tǒng)計



圖8 方法1擴(kuò)增NK細(xì)胞純度檢測



圖9 GPC3 CAR-NK細(xì)胞陽性率檢測



CAR工具細(xì)胞制備

大規(guī)模篩選CAR分子是一項繁瑣、勞動力密集、費(fèi)時的工作,為了減少這一過程的工作量,通常情況下我們使用一些工具細(xì)胞來進(jìn)行初步篩選工作,如Jurkat細(xì)胞、NK-92細(xì)胞、THP-1細(xì)胞等。賽業(yè)生物可提供多種CAR-工具細(xì)胞,極大加速了研究人員的項目進(jìn)度。


●?GPC3 CAR-Jurkat細(xì)胞構(gòu)建及功能評價

圖10 GPC3 CAR-Jurkat細(xì)胞構(gòu)建及功能驗證實驗結(jié)果

(A. GPC3 CAR-Jurkat細(xì)胞陽性率檢測結(jié)果,顯示成功構(gòu)建GPC3 CAR-Jurkat細(xì)胞;B. 肝癌細(xì)胞株表面GPC3抗原表達(dá)量檢測;C. GPC3 CAR-Jurkat細(xì)胞同肝癌HepG2細(xì)胞共孵育后檢測活化指標(biāo)CD69以及耗竭指標(biāo)PD-1和TIM-3的表達(dá)情況,顯示GPC3 CAR-Jurkat細(xì)胞能夠被靶細(xì)胞有效活化;D. 圖C的統(tǒng)計結(jié)果。)


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