細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是現(xiàn)代生物學(xué)中的基礎(chǔ)和重要環(huán)節(jié)之一，在生物研究、藥物篩選和制造等領(lǐng)域中都具有重要作用。倉鼠致力于成為肺細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的研究對象，由于倉鼠的體積較小、生長速度快、易于操作，而成為了許多生物學(xué)實驗室實驗的首選。然而，倉鼠肺細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)也需要一定時間和經(jīng)驗的積累，才能得到高質(zhì)量的細(xì)胞培養(yǎng)。下面是我作為一名生物學(xué)教師在教學(xué)和實驗中總結(jié)的一些心得體會，分享給大家如何成功培養(yǎng)倉鼠肺細(xì)胞的方法。

一、 準(zhǔn)備工作

1.1 培養(yǎng)用品和設(shè)備的準(zhǔn)備

倉鼠肺細(xì)胞培養(yǎng)需要準(zhǔn)備培養(yǎng)生物品、培養(yǎng)基、平皿、玻璃移液器、生物安全柜、離心機(jī)、CO2培養(yǎng)箱、顯微鏡等一系列設(shè)備和培養(yǎng)用品。

1.2 前期準(zhǔn)備

使用培養(yǎng)瓶需要事先進(jìn)行高壓消毒處理；準(zhǔn)備足夠數(shù)量的無菌移液管、離心管、超凈工作臺；分裂細(xì)胞前用PBS清洗和消化細(xì)胞。

1.3 堅持操作規(guī)范

操作實驗室中應(yīng)該遵守科學(xué)的操作規(guī)范，保證操作的無菌化和避免可能造成傷害的事故。手套、洗手液、消毒酒精等日常必備品應(yīng)該保證充足存量，不可揮霍而造成無法控制的污染。

二、 培養(yǎng)基質(zhì)

2.1 基礎(chǔ)培養(yǎng)基的選擇

DMEM（Dulbecco的修行的最小是本能培養(yǎng)基），DMEM/F-12、RPMI，這些培養(yǎng)基都可以用于倉鼠肺細(xì)胞培養(yǎng)，但不同的培養(yǎng)基會對細(xì)胞生長情況有著差異。DMEM/F-12是其中的一種普遍選用的培養(yǎng)基，配制的質(zhì)量水平的高低非常關(guān)鍵，同時提供穩(wěn)定的營養(yǎng)，使細(xì)胞能夠健康生長。

推薦使用培養(yǎng)基和添加劑 RPMI-1640（中喬新舟 貨號：ZQ-200）+10%胎牛血清（中喬新舟 貨號：ZQ500-A）+1%雙抗（中喬新舟 貨號：CSP006） 推薦完全培養(yǎng)基貨號 ZQ-201

2.2 改進(jìn)培養(yǎng)基的制備

在基礎(chǔ)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，可以根據(jù)肺細(xì)胞的生長特性和細(xì)胞培養(yǎng)的需要，將培養(yǎng)基改進(jìn)成指定的培養(yǎng)基。添加成分，比如高濃度的FBS，高濃度的青霉素-鏈霉素可以增加活性因子的含量，使得培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量，生長情況更為理想。

三、 培養(yǎng)條件的控制

控制細(xì)胞培養(yǎng)過程中的環(huán)境因素，以維持細(xì)胞的適宜生長。細(xì)胞的適宜生長環(huán)境包括適宜的溫度和二氧化碳含量以及適宜的培養(yǎng)時間間隔等。

3.1 保持適宜的溫度和濕度

目前，最為常見的細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境是37 °C和5% CO2氣氛下，同時控制相對濕度在90 ± 5%之間。

3.2 CO2培養(yǎng)箱

CO2培養(yǎng)箱需定期清潔，清潔方法：使用70%的酒精或其他合適的消毒劑擦拭。

3.3 觀察培養(yǎng)時間間隔

對于快速增殖的細(xì)胞，3-4 days 相當(dāng)于一代細(xì)胞的時間周期，而對于增殖速度慢的細(xì)胞來說，時間周期更長。在操作時盡量保留時間記錄，更好地把控肺細(xì)胞培養(yǎng)的時間，掌握細(xì)胞生長的情況。

四、 培養(yǎng)細(xì)胞

4.1 防止污染的發(fā)生

重復(fù)使用的培養(yǎng)習(xí)慣可能會導(dǎo)致污染，完全切斷材料交叉作用的途徑，例如對積液、噴霧、管道、培養(yǎng)瓶口等位置的操作，需要避免接觸到舌韌帶。畢竟最終目的是待細(xì)胞健康生長，將細(xì)胞培養(yǎng)至指定定量。

4.2 觀察細(xì)胞孵化

觀察倉鼠肺細(xì)胞比較直接的指標(biāo)是細(xì)胞的數(shù)量和形態(tài)，通過觀測細(xì)胞的生長期，可以很好地控制肺細(xì)胞的生長情況。等級方式評估細(xì)胞增殖：通常情況下，如果細(xì)胞的涂片密度超過了80%，就需要移動這些細(xì)胞.

4.3 在合適的時間進(jìn)行細(xì)胞傳代

當(dāng)細(xì)胞在初始培養(yǎng)器中集聚到較高濃度時，就需要移至新的培養(yǎng)器中，并向其中添加新鮮的培養(yǎng)基，供細(xì)胞繼續(xù)生長。傳代的間隔時間，同樣影響到細(xì)胞的養(yǎng)殖效果

五、 維持細(xì)胞健康

5.1 預(yù)防感染細(xì)菌

肺細(xì)胞培養(yǎng)時，最容易出現(xiàn)的問題是細(xì)菌的污染，因此需要在培養(yǎng)過程中加入抗生素，并進(jìn)行嚴(yán)格的衛(wèi)生操作。

5.2 避免細(xì)胞自發(fā)凋亡和細(xì)胞受傷

衛(wèi)生操作越好，越能讓細(xì)胞在良好的狀態(tài)下持續(xù)繁殖。同時，避免細(xì)胞受傷，減少不必要的寧量移除，是保持肺細(xì)胞培養(yǎng)健康的重要條件。

六、 結(jié)束實驗

6.1 完成實驗記錄

細(xì)胞培養(yǎng)的欣喜和疲憊都是需要用實驗日記記錄下來的。日記上，除了寫實驗操作過程的細(xì)節(jié)，還需要添加圖表記錄數(shù)據(jù)和細(xì)胞孵化的時間統(tǒng)計表。

6.2 清潔工作區(qū)域以及材料

完成實驗后，及時清理工作區(qū)域，分類清理之后放置到恰當(dāng)?shù)奈恢?。同時處理好離心管，移液管等所有材料，干凈無污染地進(jìn)行妥善處置。

總之，倉鼠肺細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)需要完善的實驗操作，科學(xué)規(guī)范的操作能夠為我們的實驗提高便利性，從而取得更加優(yōu)異的研究