JM109(DE3)?感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品編號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

MCC0113

JM109(DE3)?感受態(tài)細(xì)胞

100μl*10

保存條件：-80℃。

1.產(chǎn)品簡介：

JM109(DE3)菌株來源于JM109，用于高效表達(dá)克隆于含有噬菌體T7啟動(dòng)子的表達(dá)載體(如pET系列)的基因。λ噬菌體DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶，該區(qū)整合于JM109的染色體上，所以稱為JM109(DE3)。

基因型：endA1 recA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 (rk-,mk+)relA1supE44D(lac-proAB) [F??traD36 proAB laqI qZΔM15](DE3)

特點(diǎn)：可同時(shí)表達(dá)T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX，pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。JM109(DE3)菌株不可用于藍(lán)白斑篩選試驗(yàn)。JM109(DE3)感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率高于108?cfu /μg DNA。

2.使用說明：

1．取100 μl感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中融化。

2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30min。
3．42℃熱擊45sec，然后快速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3min，該過程不要搖動(dòng)離心管。
4．每個(gè)離心管中加入450 μl無菌的2YT或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，?150 rpm振蕩培養(yǎng)45～60min使菌體復(fù)蘇。
5．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12~16h。

3.注意事項(xiàng)：

1．剛化凍的細(xì)胞轉(zhuǎn)化效率最高，避免反復(fù)化凍。

2．整個(gè)動(dòng)作要輕柔。

3．質(zhì)粒質(zhì)量和濃度等的差異會使轉(zhuǎn)化效率有所下降。

*本試劑僅供實(shí)驗(yàn)室研究使用