類器官養(yǎng)不好，活性是根本，消化是起點(diǎn)，有多少同學(xué)老師掉進(jìn)過起點(diǎn)的坑？

您是否把幾種膠原酶組合一下，就認(rèn)為可以消化好組織？

您是否買一款消化液消化到單細(xì)胞，遲遲等不到類器官生長？

您是否辛苦消化完，鑒定不到活細(xì)胞，更是看不到活著的類器官？

您是否消化后，獲得的高粘性的上清，過濾不到細(xì)胞？?

類器官培養(yǎng)步步驚心，有多少人倒在了消化坑邊。小楨介紹過保護(hù)液來保護(hù)組織活性的重要性，但是如果消化不好，一樣前功盡棄。針對(duì)類器官構(gòu)建，目前以膠原酶消化為主，如何高效的消化組織且能有效保持細(xì)胞活性一直都是類器官構(gòu)建上一個(gè)難題。有些消化液消化效率非常高，但是容易把組織塊消化成單細(xì)胞，很難生長成類器官。更有甚者直接破壞細(xì)胞，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)容物釋放，上清無法通過濾網(wǎng)，得不到能夠用于類器官培養(yǎng)的細(xì)胞團(tuán)。

有沒有一款消化液，可以彌補(bǔ)以上問題？

伯楨生物針對(duì)于類器官構(gòu)建量身定制的腫瘤組織消化液（貨號(hào)K601003）/正常組織消化液（貨號(hào)K601008），成功逆襲。

伯楨研發(fā)團(tuán)隊(duì)通過溯源組織發(fā)育邏輯，解析組織成分，針對(duì)性調(diào)整膠原酶配方，提高組織消化效率的同時(shí)，避免細(xì)胞損傷，并添加了保護(hù)組織活性成分，開發(fā)出針對(duì)類器官的消化液。該消化液可以實(shí)現(xiàn)在保護(hù)組織活性的同時(shí)，高效的消化組織團(tuán)塊，使其快速達(dá)到構(gòu)建類器官的標(biāo)準(zhǔn)大?。?~5個(gè)細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán)。）

?快問快答

1.這個(gè)腫瘤消化液所有腫瘤都適合？

是的！這個(gè)是一款腫瘤通用消化液，主要以消化時(shí)間調(diào)整來適配各種腫瘤，比如一些間質(zhì)比較多的腫瘤（胰腺癌）消化時(shí)間就適當(dāng)需要延長，如果是一些比較松散的腫瘤消化時(shí)間就適當(dāng)縮短。

2.到底消化到什么樣子比較合適?消化的時(shí)間怎么判斷？

?一般情況下，樣本的消化時(shí)間在30-120分鐘之間（穿刺樣本在10分鐘甚至更短），建議20分鐘以后，每隔10分鐘鏡檢一次（取10μL消化液于培養(yǎng)皿中，在顯微鏡下觀察是否消化下來細(xì)胞團(tuán)）；

?消化至溶液中的細(xì)碎組織可以通過1mL的無菌吸頭。消化期間可以使用不同規(guī)格（順序從大到小如10mL，5mL，1mL）的移液管吹打組織消化懸液，幫助充分消化。

注：建議初學(xué)者設(shè)置時(shí)間梯度實(shí)驗(yàn)，針對(duì)不同癌種，甚至是不同患者的組織標(biāo)準(zhǔn)，通過時(shí)間梯度實(shí)驗(yàn)，摸索適合自己的消化時(shí)間。

3.過濾時(shí)為什么有的組織是用70um細(xì)胞篩，有的是用100um細(xì)胞篩？

正常組織的干細(xì)胞團(tuán)塊比較小，70um細(xì)胞篩就好了，腫瘤組織的干細(xì)胞團(tuán)塊比較大需要用到100um細(xì)胞篩才可以。

4.怎么減少原代細(xì)胞團(tuán)塊的損失？

?在用100μm細(xì)胞篩（腫瘤組織）/70μm細(xì)胞篩（正常組織）過濾細(xì)胞懸液時(shí)，可以使用槍頭適當(dāng)研磨組織碎片，提高回收效率。
?在用100μm細(xì)胞篩（腫瘤組織）/70μm細(xì)胞篩（正常組織）過濾細(xì)胞懸液后，可使用1mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基（上皮類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基（貨號(hào)：B213151）；腫瘤類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基（貨號(hào)：B213152））沖洗用于消化組織的離心管，后再次過濾。
?離心時(shí)候推薦使用水平離心機(jī)，角轉(zhuǎn)子離心機(jī)，會(huì)因?yàn)槭芰Σ痪鶎?dǎo)致有些細(xì)胞過度貼壁甚至破損，影響回收。

5.我看nature protocol有的用膠原酶法，有的用EDTA法我應(yīng)該如何選擇？

?膠原酶法：膠原酶僅對(duì)細(xì)胞間質(zhì)有消化作用而對(duì)上皮細(xì)胞影響不大。因此適用于消化分離纖維性組織、上皮及癌組織，可使上皮細(xì)胞與膠原成分分離而不受損害。
優(yōu)勢(shì)：上手比較簡單。
劣勢(shì)：雖對(duì)活性有保護(hù)，但是還有一定損傷。（只能做到盡可能把損傷做到最小）

?EDTA：一些組織細(xì)胞，尤其是上皮組織細(xì)胞，在生長過程中需Ca2+?和Mg2+參與細(xì)胞間連接，維持組織的完整性，EDTA從細(xì)胞生存環(huán)境中奪取Ca2+和Mg2+，并與這些離子形成螯合物，從而使細(xì)胞分離。
優(yōu)勢(shì)：對(duì)組織活性幾乎沒有損傷。
劣勢(shì)：上手難度高。（比如小鼠小腸EDTA消化吹打后陷窩脫落，非?？简?yàn)技術(shù)，操作的好，獲得陷窩多，操作不好，很難獲得隱窩）