最近收到了很多大家反饋的細胞培養(yǎng)問題，今天結合多年實踐經驗和細胞培養(yǎng)指南，為大家講述細胞從復蘇、傳代到凍存等一系列過程及常遇到的難題和小細節(jié)。

◆如何查找細胞培養(yǎng)條件和細胞的來源等信息？

不同細胞的培養(yǎng)基是不同的。ATCC等官方數據庫針對不同細胞株，會有詳細介紹，包括：培養(yǎng)基的類型、培養(yǎng)條件、細胞來源、生長的狀態(tài)圖等?？梢栽谫徺I細胞前查找相關信息，挑選符合實驗研究的細胞系，做好充分準備。

◆ 大多數細胞系可以在不止一種培養(yǎng)基中生長，那可以替換嗎?

不建議突然更換培養(yǎng)基，當培養(yǎng)條件改變時，細胞形態(tài)狀態(tài)會發(fā)生很大的變化，如果一定要更換培養(yǎng)基，可以做平行測試再決定是否可以更換。

◆ ?培養(yǎng)基為什么一般都是偏紅色?

因為培養(yǎng)基加了酚紅作指示劑，指示pH范圍為6~8，培養(yǎng)基偏酸則發(fā)黃，偏堿則發(fā)紫，需要及時換液，更換新鮮的培養(yǎng)基，以維持細胞良好的生長環(huán)境。一些特殊的細胞需要用無酚紅的培養(yǎng)基，需要及時觀察細胞。

◆ 為什么細胞復蘇后，很多難以貼壁?

可能是細胞凍存時狀態(tài)差或者復蘇時動作太慢導致細胞死亡。切記融化速度要快，也要離心去掉DMSO。若未貼壁的細胞依然存活，可以離心收集重新接種回原瓶中，并調整血清比例至15%輔助貼壁培養(yǎng)。

◆ ?為什么傳代或復蘇后細胞貼壁了，卻長不起來?

可能是細胞密度的問題，一些細胞傾向于維持一定的密度生長，若細胞生長緩慢，可將細胞轉移到較小的培養(yǎng)瓶/皿中培養(yǎng)或提高血清比例培養(yǎng)。

◆ ?有必要每天觀察細胞嗎?

一般的腫瘤細胞我們是隔天傳代，但是切不可忽略對細胞的觀察，每天都要觀察：肉眼觀察培養(yǎng)基狀況、顯微鏡下觀察細胞生長狀況等。有一些細胞完全攤開需要一定的時間，在未貼壁前減少挪動觀察，有助于貼壁。

◆??幾天換培養(yǎng)基?

正常情況下，培養(yǎng)液偏紅色。如果細胞維持在pH6.5～6.6條件下，培養(yǎng)基變黃，說明培養(yǎng)液中代謝產物已堆積到一定量，細胞會脫落死亡，需要更換新鮮培養(yǎng)液。一般細胞生長旺盛時1～2天換一次，生長緩慢時，3～4天亦可。