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每日科研進(jìn)展l2022.06.29lRNAi沉默BtPPO1基因提高煙粉虱獲取和保留番茄褪綠病毒的能力

2023-08-07 10:45 作者:RNA生物農(nóng)藥  | 我要投稿


RNAi沉默BtPPO1基因能夠提高煙粉虱獲取和保留番茄褪綠病毒的能力

番茄褪綠病毒(ToCV)嚴(yán)重影響了世界各地的番茄生產(chǎn)。ToCV由世界上一種嚴(yán)重的農(nóng)業(yè)害蟲煙粉虱(Bemisia tabaci)半持續(xù)傳播。然而,ToCV與其煙粉虱載體之間的相互作用機(jī)制仍知之甚少。

該研究之前的轉(zhuǎn)錄組分析表明,在獲得ToCV后,煙粉虱中一個(gè)免疫相關(guān)基因酚氧化酶prophenoloxidasePPO)的表達(dá)水平增加,這表明PPO可能參與了ToCV與其載體之間的相互作用機(jī)制。

為了確定PPO在煙粉虱獲取和保留ToCV中的作用,克隆了BtPPOBtPPO1BtPPO2)的完整開放閱讀框(ORF),然后進(jìn)行了結(jié)構(gòu)和系統(tǒng)發(fā)育分析。BtPPOs與半翅目昆蟲的PPO基因密切相關(guān)。

圖 1. BtPPOs基因的序列及系統(tǒng)進(jìn)化樹分析

逆轉(zhuǎn)錄定量PCRRT-qPCR)檢測BtPPOs的時(shí)空表達(dá),表明BtPPOs在所有組織和發(fā)育階段均有表達(dá)。

圖 2. BtPPOs基因的時(shí)空表達(dá)分析

同時(shí)也發(fā)現(xiàn),只有BtPPO1在煙粉虱獲得ToCV 1224小時(shí)后顯著上調(diào)。

圖 3. BtPPOs基因受到ToCV感染后的誘導(dǎo)效果分析

根據(jù)石蠟熒光探針熒光原位雜交(FISH)實(shí)驗(yàn),證實(shí)ToCVBtPPO1共定位于煙粉虱的胸部,這進(jìn)一步揭示了它們相互作用的位置。


圖 4. BtPPO1與ToCV共定位分析

最后,利用RNA干擾(RNAi)技術(shù)研究了BtPPOs對煙粉虱ToCV獲取和保留的影響。結(jié)果表明,RNAi基因BtPPO1后,顯著提高了煙草花葉病毒的滴度。

圖 5. BtPPOs基因RNAi效率分析

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? 圖 6. RNAi抑制BtPPOs后,感染ToCV病毒滴度分析

這些結(jié)果表明,BtPPO1參與了煙粉虱對ToCV的獲取和保留。

原文鏈接:

https://doi.org/10.3390/ijms23126541


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