蛋白質(zhì)表達(dá)起始于N端，蛋白質(zhì)N端序列對(duì)于蛋白的功能、蛋白穩(wěn)定性、以及在細(xì)胞中的定位都有著重要作用，因此蛋白質(zhì)N端序列分析能為蛋白質(zhì)功能、定位等研究提供重要依據(jù)。

測序原理

I、Edman降解測序法

Edman測序循環(huán)包括3步：

1. 在堿性條件下，PITC與蛋白N端的游離氨基結(jié)合

2. 在酸性溶液中，N端殘基被切除

3. PITC結(jié)合的殘基轉(zhuǎn)化成為更為穩(wěn)定的PTH殘基，經(jīng)過在線的HPLC分析，根據(jù)洗脫時(shí)間不同，從而確定氨基酸種類。

II、質(zhì)譜測序法

質(zhì)譜測序原理是將蛋白質(zhì)經(jīng)胰蛋白酶酶切后，直接用串聯(lián)質(zhì)譜測定酶切肽段混合物，然后通過一級(jí)質(zhì)譜選擇N端肽段離子進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜分析而得到N端序列。能夠?qū)旌系鞍住⒛┒朔忾]或糖基化的蛋白質(zhì)進(jìn)行測序。

測序平臺(tái)

SHIMADZU PPSQ-33A測序儀

平臺(tái)優(yōu)勢

? 高靈敏度檢測PTH-氨基酸

? UV-VIS探測器SPD-20A

? 穩(wěn)定分析微量樣品

? 準(zhǔn)確區(qū)分分子量相近的氨基酸（I/L、Q/K）

Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀

平臺(tái)優(yōu)勢

? 分辨率高達(dá) 500,000 FWHM

? 高容量離子傳輸管

? 超低檢測限的電動(dòng)離子漏斗

? 高清ETD，顯著增加碎片離子覆蓋率

測序亮點(diǎn)

? 可測定多種形式的樣品：蛋白溶液、PVDF蛋白條帶

? 僅需1-10 ug蛋白樣品即可完成檢測

? 可測定蛋白N端多達(dá)70個(gè)氨基酸序列

? 全自動(dòng)序列分析，序列分析更準(zhǔn)確

? 測序不受N端封閉，PEG和糖基化等N端修飾的影響