牙髓干細胞的簡介

牙髓干細胞?(dental pulp stem cells, DPSCs)?是間充質(zhì)干細胞?(mesenchymal stem cell, MSC)?的一種，于牙齒內(nèi)部的牙髓組織中分離出的成纖維狀細胞，可自我更新及分化為硬骨、脂肪、軟骨、肌肉與神經(jīng)等細胞系類型。牙齒干細胞有很多種，在牙齒所發(fā)現(xiàn)的各種干細胞??(stem cells)，皆有相當大的潛力，目前在牙齒已陸續(xù)發(fā)現(xiàn)各種不同的干細胞，包括：乳牙牙髓干細胞?(stem cells from human exfoliated deciduous teeth, SHED)、恒牙牙髓干細胞?(pulp stem cells)?、未完全發(fā)育牙根尖干細胞?(stem cells from apical papilla, SCAP)?及牙周干細胞(periodontal stem cells)?等。因此，目前已有乳牙銀行的產(chǎn)生，以保留脫落的乳牙，可分離乳牙牙髓干細胞?(DPSCs)?作為將來可能的應用，此外也在恒牙的牙髓中亦可找到干細胞并已證實具有轉分化為牙本質(zhì)母細胞?(odontoblasts)，促進牙本質(zhì)再生(dentinogenesis)?的作用以應用于治療齲齒。

牙髓干細胞?(dentalpulp stem cells, DPSCs)?的分離培養(yǎng)：

1. 將新鮮采集的牙髓，置于10 cm 培養(yǎng)皿中，用DPBS 清洗 3 遍，操作過程盡量避免污染。2. 接著加入5ml完全培養(yǎng)基(完全培養(yǎng)基的配置：DMEM/F12 + 20% FBS + 1% L-Glutamine + 1% NEAA + 1%?雙抗)?浸潤牙髓組織，用無菌手術剪將其剪碎。3. 將其剪碎組織塊固定在培養(yǎng)皿中，于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱孵育30min以使組織塊黏貼在培養(yǎng)皿壁上。4. 接種于6 cm培養(yǎng)皿中加入2ml完全培養(yǎng)基。5. 48 h 換液，此后每 3到4天更換 1 次完全培養(yǎng)基。培養(yǎng)約 10 ~ 14 天會有細胞從組織塊中爬出，細胞達到80% ~ 90%后，用胰酶-EDTA在 37℃消化，按1:3 比例傳代。

牙髓MSC 傳代與培養(yǎng)：

1. 吸棄培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，加入適量 DPBS 輕輕沖洗1次。2. 根據(jù)培養(yǎng)皿適量加入胰酶-EDTA，于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱作用2~3min，用吸管吹打培養(yǎng)皿底部，鏡下觀察細胞完全脫落后。3. 根據(jù)胰酶-EDTA使用量加入完全培養(yǎng)基，與細胞混合均勻再1200×rpm離心3~5min。4. 謹慎吸出上清，細胞團塊用3ml~10ml完全培養(yǎng)基懸浮后，混勻細胞懸液。5. 按照1:3~1:4的比例進行傳代或按照3~6*104/ml的細胞密度將細胞接種至T25或? T75培養(yǎng)瓶或其它培養(yǎng)器皿中傳代培養(yǎng)，放入37℃、5% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。6. ?每2天更換一次培養(yǎng)基，培養(yǎng)2~4天，待細胞融合度達到80%左右時，參照操作步驟1~3收獲細胞。7. 細胞凍存：將細胞團塊懸浮于適量?(0.5~1×106cell/mL)?凍存液，-80℃冰箱放置24h，轉入液氮罐凍存。

作者：海星生物

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