HE染色法
HE染色也稱蘇木精-伊紅染色,它是常規(guī)染色。蘇木精是一種天然染料,它本身并不能染色,在經(jīng)氧化后變成蘇木紅才是真正的染料,蘇木對細胞核的親和力并不強,而在媒染劑的幫助下才能較好顯示細胞核,此時細胞核呈紅色,只有在堿性環(huán)境中,蘇木才變成藍色。伊紅Y是人工全盛染料,它可能是通過滲透或彌散作用完成染色的,因此和組織萬分結(jié)合是不牢固的。它對細胞質(zhì)著色。
一、具體操作
1. ?準(zhǔn)備組織切片。
2. ?37℃溫BSS漂洗3次,每次2-3 min。
3. ?中性福爾馬林固定30 min。
4. ?蒸餾水漂洗1次。
5. ?用蒸餾水稀釋的蘇木精液(1/20)染10 min。
6. ?自來水洗。
7. ?置人1%NaHCO3液中漂洗至藍紫色。
8. ?伊紅染液染30 s-1 min。
9. ?蒸餾水洗。
10. ?迅速通過丙酮2次,每次3-5 min。
11. ?通過2:1丙酮-二甲苯3次,每次1-2 min。
12. ?純二甲苯5-10 min。
13. ?樹膠封片,即可鏡檢。
二、結(jié)果評價
細胞核染藍紫色,細胞質(zhì)桃紅色。組織細胞排列緊密,凋亡細胞與正常細胞分離,胞核皺縮,但因與組織分離,凋亡細胞略顯大。
注意事項
1. 整個操作動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞。
2. 操作時注意避光,反應(yīng)完畢后盡快在一小時內(nèi)檢測。
常見問題
腫瘤細胞一般體積大,是正常細胞的3倍以上,核大,核畸形怪狀,染色深,和分裂相多見,而且多見病理性核分裂相.腫瘤細胞排列松散,容易脫落。腫瘤細胞核漿比例失調(diào),細胞漿染色改變,或者出現(xiàn)空泡,癌細胞背景則是多有壞死。光學(xué)顯微鏡是利用光學(xué)原理,把人眼所不能分辨的微小物體放大成像,以供人們提取微細結(jié)構(gòu)信息的光學(xué)儀器。通過光學(xué)顯微鏡檢測腫瘤細胞形態(tài)有兩種方法:HE 染色法和瑞氏和杰姆薩混染法。