牛血清蛋白修飾酚酸類及生物堿類小分子/偶聯(lián)微球的蛋白/牛紅細(xì)胞SOD的研究制備
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牛血清蛋白修飾酚酸類及生物堿類小分子研究:
采用紫外吸收光譜,熒光光譜,同步熒光光譜,時(shí)間分辨熒光光譜,圓二色譜法,紅外光譜和拉曼光譜,研究了牛血清白蛋白分子間的相互作用,得出了它們相互作用的猝滅機(jī)理,結(jié)合常數(shù),熱力學(xué)結(jié)合參數(shù),分子間的結(jié)合距離,分子間的結(jié)合方式和常見金屬離子存在條件下對(duì)結(jié)合反應(yīng)的影響,并根據(jù)上述研究結(jié)果分析了生物活性基團(tuán).所得結(jié)果對(duì)生物化學(xué),臨床醫(yī)學(xué)和動(dòng)力學(xué)具有十分重要的指導(dǎo)意義.主要步驟: (1)通過紫外吸收光譜法,利用蛋白質(zhì)的紫外吸收光譜的峰位和峰強(qiáng)度的變化研究了分子與牛血清白蛋白分子間的相互作用。
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以氨基化多孔微粒為固相介質(zhì),牛血清白蛋白( BSA)為模型蛋白,通過戊二醛交聯(lián)反應(yīng),制備牛血清白蛋白偶聯(lián)微球,通過離心沉降微球,高效液相色譜法測(cè)定上清液中濃度的變化,并代入Rosenthal模型,研發(fā)出一種新型方法用于蛋白結(jié)合常數(shù)( Ka )的快速測(cè)定.利用該方法測(cè)定了瑞替加濱與BSA的結(jié)合常數(shù),并與傳統(tǒng)熒光光譜法對(duì)比,兩種方法結(jié)果一致.鍵合蛋白微球經(jīng)PBS緩沖液充分洗脫后,可重復(fù)利用.
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