1.(單選題，4 分) 限制性核酸內(nèi)切酶是由細(xì)菌產(chǎn)生的,其生理意義是

A.修復(fù)自身的遺傳缺陷?

B.促進(jìn)自身的基因重組?

C.強(qiáng)化自身的核酸代謝

D.提高自身的防御能力

2.(單選題，4 分) 下列五個(gè) DNA 片段中含有回文結(jié)構(gòu)的是

A.GAAACTGCAGTTTC?

B.GAAACTGGTCAAAG?

C.GAAACTGGAAACTG?

D.GAAACTGCTTTGAC

3.(單選題，4 分) 天然 PstI 限制性內(nèi)切酶的來源是?

A.Providencia stuartii?

B.Haemophilus influenzae?

C.Escherichia coli?

D.Bacillus amyloliquefaciens?

4.(單選題，4 分) T 4 -DNA 連接酶催化相鄰的兩核苷酸通過形成磷酸二酯鍵將兩段 DNA 片段連接在一 起,其底物的關(guān)鍵基團(tuán)是?

A.2' -OH 和 5' -P?

B.3' -OH 和 2' -P?

C.3' -OH 和 5' -P?

D.5' -OH 和 3' –P?

?5.(單選題，4 分) 下面那個(gè)或者哪些粘末端可以由 DNA 聚合酶補(bǔ)平?

C.二圖皆可?

D.二圖都不能

6.(單選題，4 分) 下面那個(gè)或者哪些粘末端可以由 DNA 聚合酶補(bǔ)平?

C二圖皆可

D.二圖都不能

?7.(單選題，4 分) 缺口平移標(biāo)記法引入放射性標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中的,32P 來自于

A.NTP 中的α磷酸基團(tuán)

B.NTP 中的γ磷酸基團(tuán)?

C.dNTP 中的α磷酸基團(tuán)?

D.dNTP 中的γ磷酸基團(tuán)

8.(單選題，4 分) 大腸桿菌 DNA 聚合酶 I 不具有下列哪種酶活性

A.5’→3’的 DNA 聚合酶活性?

B.3’→5’的核酸外切酶活性?

C.5’→3’的核酸外切酶活性?

D.3’→5’的 DNA 聚合酶活性?

9.(單選題，4 分) 下列反應(yīng)是由哪種酶完成的

A.T4 多核苷酸激酶

B.堿性磷酸單酯酶?

C.末端核苷轉(zhuǎn)移酶?

D.Taq DNA 聚合酶?

?10.(單選題，4 分) 多核苷酸激酶催化 DNA 5-OH 轉(zhuǎn)化為 5’-P 基團(tuán)過程中的磷酸基團(tuán)的供體是 A.ATP 中的α磷酸基團(tuán)?

B.ATP 中的γ磷酸基團(tuán)?

C.dATP 的α磷酸基團(tuán)

D.dATP 的γ磷酸基團(tuán)?

?11.(單選題，4 分) 下列反應(yīng)是由哪種酶催化完成的

A.T4 多核苷酸激酶?

B.堿性磷酸單酯酶?

C.末端核苷轉(zhuǎn)移酶

D.Taq DNA 聚合酶?

?12.(單選題，4 分) 下面哪一種不是產(chǎn)生星星活性的主要原因?( )?

A.甘油含量過高?

B.反應(yīng)體系中含有有機(jī)溶劑?

C.含有非 Mg2+的二價(jià)陽離子

D.酶切反應(yīng)時(shí)酶濃度過低

13.(單選題，4 分) 下列哪一種酶作用時(shí)需要引物? ( )

A.限制性內(nèi)切酶

B.末端轉(zhuǎn)移酶?

C.DNA 連接酶?

D.反轉(zhuǎn)錄酶

14.(單選題，4 分) 在基因工程中,可用堿性磷酸酶( )

A.防止 DNA 的自身環(huán)化?

B.制備突出的 3-末端?

C.封閉切口

D.切平粘末端?

15.(單選題，4 分) II 類限制性內(nèi)切核酸酶 ( )

?A.有內(nèi)切核酸酶和甲基化酶活性且經(jīng)常識別回文序列

B.僅有內(nèi)切核酸酶活性,甲基化酶活性由另外一種酶提供?

C.限制性識別非甲基化的核苷酸序列

D.僅有外切核酸酶活性,甲基化酶活性由另外一種酶提供?

?16.(單選題，4 分) 下面關(guān)于限制性核酸內(nèi)切酶的表示方法中,正確的一項(xiàng)是( )。

A.Sau 3A I?

B.E.coR I?

C.hind III?

D.Sau3A I?

?17.(單選題，4 分) .限制性內(nèi)切核酸酶的星號活性是指 ( )。

A.在非常規(guī)條件下,識別和切割序列發(fā)生變化的活性

B.活性大大提高?

C.切割速度大大加快?

D.識別序列與原來的完全不同?

18.(單選題，4 分) 以下酶切位點(diǎn)哪兩個(gè)是同尾酶

A.①②

B.①③

C.③④

D.②④?

?19.(單選題，4 分) 以下酶切位點(diǎn)哪兩個(gè)是同裂酶

A.①②

B.①③?

C.③④?

D.②④?

20.(單選題，4 分) 以下哪種基因突變對酶的功能沒有影響

A.同義突變?

B.無義突變

C.移碼突變?

D.缺失突變?

?1.(單選題，5 分) 以下不屬于 PCR 反應(yīng)原料的是

A.模板 DNA?

B.引物?

C.DNA 聚合酶及其緩沖液（含鎂離子）?

D.ddNTP?

2.(單選題，5 分) 以下 PCR 反應(yīng)程序描述錯(cuò)誤的是?

A.PCR 反應(yīng)程序是為了更好地發(fā)揮 DNA 聚合酶活性?

B.變性是為了去除體系內(nèi)所有干擾 DNA 聚合酶活性的雜質(zhì)

C.退火是為了讓模板和引物形成雜合雙鏈，從而為 DNA 聚合酶提供反應(yīng)起始位點(diǎn)

D.延伸為 DNA 聚合酶提供了充足的反應(yīng)條件及時(shí)間?

?3.(單選題，5 分) 關(guān)于 PCR 的不確定性，以下描述錯(cuò)誤的是：?

A.引物是消耗品，每輪反應(yīng)會根據(jù)模板的量消耗掉等量的底物，增大模板數(shù)量有助于提 高產(chǎn)物得率?

B.多底物導(dǎo)致酶促反應(yīng)的開始時(shí)間不確定，不充足的反應(yīng)時(shí)間可能導(dǎo)致殘缺的副產(chǎn)物的 出現(xiàn)C.引物之間的互補(bǔ)內(nèi)耗會產(chǎn)生非特異性產(chǎn)物?

D.DNA 對引物的匹配度要求不是 100%，從而導(dǎo)致了錯(cuò)配，進(jìn)而出現(xiàn)非特異擴(kuò)增?

4.(單選題，5 分) 如圖是一個(gè) PCR 產(chǎn)物電泳圖，其中 1、2 泳道是正確結(jié)果，7 泳道是 Marker，以下描述 錯(cuò)誤的是：

A.泳道 3、4 可能是引物出現(xiàn)錯(cuò)配導(dǎo)致的

B.泳道 5、6 可能是引物二聚體的生成導(dǎo)致目標(biāo)產(chǎn)物減少?

C.圖中只有 1、2 泳道是成功的實(shí)驗(yàn)結(jié)果?

D.泳道 3、4 可能是引物出現(xiàn)發(fā)卡結(jié)構(gòu)導(dǎo)致的?

?5.(單選題，5 分) 以下是一個(gè) PCR 反應(yīng)的電泳圖，4、5 泳道是正確結(jié)果，以下描述錯(cuò)誤的是：

A.1、2 泳道的彌散、拖尾可能是 DNA 降解導(dǎo)致的?

B.1、2 泳道的大量非特異擴(kuò)增可能與 PCR 反應(yīng)程序設(shè)置不當(dāng)有關(guān)

C.1、2 泳道的大量非特異擴(kuò)增可能與酶添加過量有關(guān)

D.1、2 泳道出現(xiàn)目的條帶，可通過膠回收切割目標(biāo)位置 DNA，純化后進(jìn)行后續(xù)反應(yīng)?

6.(單選題，5 分) 以下是典型的 PCR 反應(yīng)程序，描述錯(cuò)誤的是：

A.循環(huán)開始的 95℃5min 有助于充分裂解細(xì)胞、使 DNA 和組蛋白分離，從而充分暴露模 板?

B.延伸時(shí)間的設(shè)定與酶活及產(chǎn)物長度有關(guān)，不建議過長?

C.退火溫度就是 Tm 值

D.終延伸有助于幫助反應(yīng)過程中未完全完成復(fù)制的 PCR 產(chǎn)物補(bǔ)齊，從而增加最終產(chǎn)物的量

?7.(單選題，5 分) 通常情況，以下哪些原因會導(dǎo)致 PCR 沒有產(chǎn)物： ①引物降解 ②模板降解 ③酶失活 ④反應(yīng)體系配置不當(dāng) ⑤反應(yīng)程序設(shè)置不當(dāng) ⑥模板純度低

A.①②③④⑤⑥?

B.①②③④⑤?

C.①②③④?

D.①②③⑤?

?5.(單選題，10 分) 核酸瓊脂糖電泳，說法錯(cuò)誤的是?

A.相同帶電下，分子量越大跑的越慢?

B.相同帶電下，分子越小跑的越快?

C.電泳緩沖液中，DNA 帶負(fù)電

D.利用瓊脂糖凝膠電泳，不但可以鑒定分子量，還可以判斷分子構(gòu)象?

6.(單選題，10 分) 以下哪一項(xiàng)與 DNA 分子遷移率無關(guān)

A.DNA 分子大小及構(gòu)象

B.緩沖液濃度及種類?

C.瓊脂糖濃度

?D.上樣量?

7.(單選題，10 分) Sanger 法測序，描述不正確的是：

A.使用同位素作為標(biāo)記，標(biāo)記位點(diǎn)是引物的一條鏈，且反應(yīng)需要分四次完成

B.無論何種方式標(biāo)記，都是 5’端序列先檢測到?

C.雙脫氧核糖核苷酸缺少的是 3‘端羥基上的氧

D.使用不同顏色熒光作為標(biāo)記，標(biāo)記位點(diǎn)是 ddNTP，且反應(yīng)需要分四次完成?

1. (單選題，4 分) 松弛型質(zhì)粒( )

   A.在宿主細(xì)胞中拷貝數(shù)較多

   B.可用氯霉素?cái)U(kuò)增

   C.一般沒有選擇標(biāo)記

   D.在宿主細(xì)胞中拷貝數(shù)較少

   ?2.(單選題，4 分) 下圖電泳照片中的泳道 2 是一質(zhì)粒電泳圖譜,請指出條帶 a,b,c 分別指哪種構(gòu)型的質(zhì)粒 DNA( )。
   

   
   

A.OC DNA, SC DNA, L DNA?

B.OC DNA,L DNA,SC DNA

C.L DNA ,OC DNA,SC DNA?

D.SC DNA,OC DNA,L DNA?

3.(單選題，4 分) pUC 系列載體含有( )基因,在特定的受體細(xì)胞中可表現(xiàn) α-互補(bǔ)作用。因此在多克 隆位點(diǎn)中插入了外源片段后,可通過 α-互補(bǔ)作用形成的藍(lán)色和白色菌落篩選重組質(zhì)粒。 A.tet r?

B.ampr?

C.lac Z’?

D.lac A?

4.(單選題，4 分) 不屬于質(zhì)粒被選為基因載體的理由是 ( )?

A.能復(fù)制?

B.有多個(gè)限制酶切點(diǎn)

C.具有標(biāo)記基因

D.是環(huán)狀 DNA?

5.(單選題，4 分) 下列哪項(xiàng)敘述不是載體必須具備的條件( )?

A.具有某些標(biāo)記基因

B.決定宿主細(xì)胞的生存?

C.能夠在宿主細(xì)胞中復(fù)制?

D.有一個(gè)或多個(gè)限制酶切點(diǎn)?

6.(單選題，4 分) 質(zhì)粒載體往往帶有一個(gè)抗菌素抗性基因,該抗性基因的主要作用是( )

A.便于與外源基因連接?

B.檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞

C.增加質(zhì)粒分子的相對分子質(zhì)量?

D.提高受體細(xì)胞的耐熱性?

7.(單選題，4 分) 在基因工程操作中,載體的本質(zhì)是雙鏈 DNA 分子,下列功能不能由載體完成的是( )?

A.目的基因的轉(zhuǎn)運(yùn)?

B.目的基因的擴(kuò)增?

C.目的基因的表達(dá)?

D.目的基因的定位?

8.(單選題，4 分) 關(guān)于 pBR322 載體的說法,下列哪個(gè)是不正確的( )?

A.含有卡那霉素抗性基因

B.含有氨芐青霉素抗性基因?

C.含有四環(huán)素抗性基因?

D.不含有氯霉素抗性基因?

9.(單選題，4 分) 關(guān)于 pUC18 載體上氨芐青霉素抗性基因的說法,哪個(gè)是正確的( )

A.載體上的抗性基因在宿主細(xì)胞內(nèi)可以表達(dá)出一種蛋白產(chǎn)物?

B.克隆策略是外源 DNA 片段插入到抗性基因,通過插入失活發(fā)篩選重組子

C.在宿主細(xì)胞內(nèi)抗性基因必須在 IPTG 存在的情況下才能表達(dá)出蛋白產(chǎn)物?

D.負(fù)載 pUC18 載體轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞,不能賦予宿主抗生素抗性?

10.(單選題，4 分) 關(guān)于藍(lán)白斑篩選,下列說法正確的是( )

A.Lac Z'基因在宿主核基因組上,缺失編碼β-半乳糖苷酶11-41 位氨基酸的序列

B.LacZΛM15 基因在宿主核基因組上,編碼β-半乳糖苷酶 N-140 氨基酸?

C.LacZΛM15 基因在宿主核基因組上,編碼β-半乳糖苷酶 C-140 氨基酸?

D.Lac Z'基因在載體上,編碼β-半乳糖苷酶 N-140 氨基酸?

11.(單選題，4 分) LacZ 基因通常用于構(gòu)建質(zhì)粒載體的目的是什么?( )

A.編碼一種限制性內(nèi)切核酸酶,在轉(zhuǎn)化細(xì)胞時(shí)用于切割載體

B.編碼藍(lán)色色素產(chǎn)物,可用于示蹤轉(zhuǎn)化的細(xì)胞

C.編碼一種酶,將 RNA 轉(zhuǎn)化為 DNA?

D.編碼一種可檢測的酶,當(dāng)基因內(nèi)部的位點(diǎn)插入任何外源片段,ORF 遭到破壞時(shí),產(chǎn)物即 不能表達(dá)?

12.(單選題，4 分) 下列哪些屬于重組 DNA 分子? ( )?

A.PCR 擴(kuò)增的 DNA 片段

? B.單鏈 RNA 與單鏈 DNA 雜交得到的產(chǎn)物

? C.人基因組片段與質(zhì)粒載體連接的產(chǎn)物?

D.存在于細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)的λ噬菌體染色體?

13.(單選題，4 分) 下圖是pBR322載體圖譜,克隆時(shí)使用Bam H1完成載體和外源基因的酶切,構(gòu)建的重組載 體導(dǎo)入受體細(xì)胞后,受體細(xì)胞應(yīng)具備下列哪種特性( )?

A.對氨芐青霉素和四環(huán)素都具有抗性?

B.對氨芐青霉素有抗性、對四環(huán)素敏感?

C.對氨芐青霉素敏感、對四環(huán)素有抗性?

D.對氨芐青霉素和四環(huán)素都具敏感

14.(單選題，4 分) 下圖是 pBR322 載體圖譜,克隆時(shí)使用 Pst 1 完成載體和外源基因的酶切,構(gòu)建的重組載體 導(dǎo)入受體細(xì)胞后,受體細(xì)胞應(yīng)具備下列哪種特性( )

A.對氨芐青霉素和四環(huán)素都具有抗性

B.對氨芐青霉素有抗性、對四環(huán)素敏感

C.對氨芐青霉素敏感、對四環(huán)素有抗性?

D.對氨芐青霉素和四環(huán)素都具敏感?

15.(單選題，4 分) 以下哪一任務(wù)不能由以下載體完成

A.DNA 克隆?

B.動物細(xì)胞表達(dá)

C.植物細(xì)胞表達(dá)?

D.制備單鏈 DNA

16.(單選題，4 分) 如圖是載體序列和目的 DNA 序列,使用 BamH I 作為酶切位點(diǎn)進(jìn)行載體構(gòu)建時(shí),以下哪種 對目的基因進(jìn)行的改造不能保證蛋白質(zhì)正確

A.利用 PCR 技術(shù)將目的基因第 15 位的 A 去除?

B.利用 PCR 技術(shù)在目的基因第 15 位的 A 前面加 TC?

C.利用 PCR 技術(shù)在目的基因第 15 位的 A 前面加 TA?

D.利用 PCR 技術(shù)在目的基因第 15 位的 A 前面加 AC?

17.(單選題，4 分) 以下哪些利用融合蛋白技術(shù)能做到 ①添加純化標(biāo)簽 ②使蛋白質(zhì)分泌到細(xì)胞外 ③胞內(nèi)定位蛋白質(zhì) ④防止蛋白質(zhì)被宿主降解?

A.①③④

B.①②?

C.①②③

D.①②③④

18.(單選題，4 分) 以下哪個(gè)載體符號代表的元件不具備基因轉(zhuǎn)錄終止功能?

A.TAA?

B.TT

C.Terminator?

D.Poly(A)

19.(單選題，4 分) 以下哪個(gè)元件在載體圖譜上必須標(biāo)注方向性(標(biāo)注箭頭)?

A.啟動子?

B.終止子

C.ori?

D.抗性基因

20.(單選題，4 分) 以下哪個(gè)元件在載體圖譜上必須標(biāo)注方向性(標(biāo)注箭頭) A.啟動子 B.終止子 C.ori D.抗性基因 20.(單選題，4 分)如圖是一個(gè)典型的細(xì)菌表達(dá)載體,對其描述不正確的是

A.可以利用谷胱甘肽融合標(biāo)簽進(jìn)行蛋白質(zhì)純化?

B.利用氨芐青霉素就可以篩選出重組子?

C.該質(zhì)粒的復(fù)制起點(diǎn)來自大腸桿菌?

D.蛋白表達(dá)受到 Lac I 的調(diào)控

5.(多選題， 7 分) 【多選題】根據(jù)以下信息(M: 2K marker; 1:目的基因 1709bp;2:cDNA 1626bp;3:單酶切重 組 pPIC9K-cgc 質(zhì)粒約 11Kb; 4: 單酶切原始 pPIC9K 質(zhì)粒約 9Kb; 5:雙酶切重組質(zhì)粒 pPIC9K-cgc;),選出以下描述正確的是

A.該基因含有至少一個(gè)內(nèi)含子

B.cDNA 是構(gòu)建載體時(shí)用到的目的基因?

C.泳道 4 和 5 的比較基本可以確定目的基因以預(yù)定方式插入載體

D.不用酶切直接將重組前后的質(zhì)粒進(jìn)行電泳也能做到很好的區(qū)分?

?8.(多選題， 7 分) 【多選題】以下描述正確的是pET28a

A.該載體的表達(dá)宿主需要是大腸桿菌 BL21(DE3)?

B.該載體上帶有蛋白純化標(biāo)簽?

C.該載體有 LacI 蛋白基因,具備藍(lán)白斑篩選功能?

D.該載體可以利用 IPTG 誘導(dǎo)蛋白表達(dá)?

9.(多選題， 7 分) 【多選題】以下描述正確的是 pPIC9K

A.該載體是穿梭質(zhì)粒?

B.該載體在酵母中是整合到基因組發(fā)揮作用的

C.該載體需要用到組氨酸營養(yǎng)缺陷型酵母?

D.可以用甲醇控制該載體在酵母中的蛋白表達(dá)?

?10.(多選題， 7 分) 【多選題】下圖是一個(gè)大腸桿菌蛋白表達(dá)電泳圖,紅色箭頭是目標(biāo)蛋白,根據(jù)圖片和補(bǔ)充 信息(M:蛋白 marker;1:IPTG 誘導(dǎo)組,細(xì)胞裂解液;2:IPTG 誘導(dǎo)組,細(xì)胞裂解后的沉淀物洗滌 液;3:IPTG 誘導(dǎo)組,沉淀用尿素溶解后的上清液;4:無誘導(dǎo)組,細(xì)胞裂解液;5:無誘導(dǎo)組,細(xì)胞裂 解后的沉淀物洗滌液;6:無誘導(dǎo)組,沉淀用尿素溶解后的上清液)判斷以下描述正確的是

A.蛋白很可能以可溶性進(jìn)行表達(dá)?

B.蛋白以包涵體形式進(jìn)行表達(dá)?

C.原始宿主細(xì)胞不能表達(dá)目標(biāo)蛋白

D.目標(biāo)蛋白可能存在活性?

答案解析： 選擇、判斷 包涵體——蛋白質(zhì)以疏水作用力聚集成團(tuán)——不溶于水，溶于高濃度尿素/鹽酸胍