植物體內(nèi)磷主要以有機磷如核酸、磷脂、植素等的形態(tài)存在于植物組織中，有機磷須經(jīng)干灰化或濕灰化分解轉(zhuǎn)變?yōu)闊o機正磷酸鹽。溶液中磷一般用比色法測定。

濕灰化應(yīng)用不同比例的HNO3、H2SO4、HCIO4的方法較為普遍。濕灰化法的消煮溫度不會超過混合酸的沸點，灰分元素不會形成難溶的硅酸鹽，而且當(dāng)用H2SO4或HCIO4消煮時，可使SiO2充分脫水且使其吸附作用降至最低限度，不致造成灰分元素測定產(chǎn)生顯著的負(fù)誤差。但是由于試劑用量大，會帶來污染的危險，試劑空白值大。當(dāng)然加有HNO3的濕灰化法，則不能在消煮液中同時測定氮。

在干灰化法中，所用的溫度有所不同。一般建議灰化溫度不超過500℃，時間為2～8h。近年來，改進的干灰法中，添加一些"助灰化劑"，在灰化時通O2，添加KHSO4等，幫助灰化。干灰化添加試劑量少，污染的可能性比濕灰化小，而且簡便易行。對于植物全磷的測定用H2SO4—H2O2消煮法，同時測定氮、磷和鉀較為方便?？傊椒ǖ倪x擇應(yīng)根據(jù)測定元素的類別、具體條件來決定。溶液中磷的測定，最常用的鉬藍比色法和釩鉬黃比色法。當(dāng)磷的含量高時，選用釩鉬黃法為佳，反之則可用鉬藍法。

?H2SO4—H2O2消煮，釩鉬黃比色法

方法原理 ?

植物樣品經(jīng)H2SO4—H2O2消煮分解制備待測液。待測液中正磷酸能與偏磷酸鹽和鉬酸鹽在酸性條件下作用，形成黃色的雜聚化合物釩鉬酸鹽，其組成還不能十分肯定，有人認(rèn)為是P2O5·V2O5·22MoO3·nH2O。溶液的黃色很穩(wěn)定，其深淺與磷含量成正比，可用比色法測定磷的含量。比色時可根據(jù)溶液中磷的濃度選擇比色波長400～490mm，磷的濃度高時選擇較長的波長，較低時選用較短的波長。釩鉬黃法要求比色液中酸的濃度（即終濃度）很寬，極限是0.04～1.6mol·L ?（H+）酸度太高時顯色不完全或不顯色，太低時則可能生成沉淀或其它物質(zhì)的顏色。釩酸鹽的終濃度范圍是8.0×10-5～2.2×10-3mol·L-’，通常用后一種濃度。鉬酸鹽的終濃度范圍是1.6×10-3~5.7×10~3mol·L~1。在正常的室溫變化范圍內(nèi)對黃色強度無影響。黃色發(fā)生很快，在最初15min內(nèi)會降低約1.3%，以后至少2h 內(nèi)很穩(wěn)定，在24h內(nèi)也無顯著變化。

本法操作簡便快速，準(zhǔn)確度和重復(fù)性較好，相對誤差為1%～3%靈敏度較鉬藍法低，適測范圍為1～20mg·L-1；對酸的濃度要求不嚴(yán)格，容易控制，在HNO3、HCI、H2SO4、HCIO4等介質(zhì)中都可適用；干擾離子少，特別是Fe3+的允許量遠高于鉬藍法。因此，該法廣泛用于植物和有機肥料樣品中磷的測定。

?主要儀器： ?消煮管（瓶）、控溫消煮爐、分光光度計。

?試劑

（1） 釩鉬酸銨試劑。稱（NH4）6MoO24HO?12.5g溶于200mL水中。另將偏釩酸銨（NH4VO3）0.625g溶于沸水150mL中，冷卻后，加入濃HNO3?125mL，再冷卻至室溫。將鉬酸銨溶液緩慢地注入釩酸銨溶液中，隨時攪拌，用水稀釋至500mL。

（2）6mol·L-1NaOH溶液。稱NaOH24g溶于水，稀釋至100mL。

（3）2，6-二硝基酚指示劑。2，6-二硝基酚0.25g溶于100mL水中。其變色范圍是pH2.4（無色）～4.0（黃色）。變色點是pH3.1。

（4）50μg′mL-1P標(biāo)準(zhǔn)溶液。準(zhǔn)確稱取經(jīng)105℃烘干的KH2PO4 ?0.2195g，溶于水，移入1000mL容量瓶，加水至約400mL，加濃硫酸5mL，用水定容。裝人塑料瓶中低溫保存?zhèn)溆谩?/p>

（5）固體Na2S2O3

（6）還原鋅粉。

（7）水楊酸一硫酸。

?操作步驟??

吸取消煮好經(jīng)過濾的待測液20～25mL（含P0.25～1.0mg），置于50mL容量瓶中，加2，6-二硝基酚指示劑2 滴，用6mol·L-1NaOH溶液中和至剛呈黃色，加入釩鉬酸銨試劑10.00mL，用水定容。放置15min后用波長450mm，在分光光度計上比色，以空白液調(diào)節(jié)儀器零點。

標(biāo)準(zhǔn)曲線制作。分別吸取50μg·mL~*P標(biāo)準(zhǔn)溶液0、1.0、2.5、7.5、10.0、15.0于50mL容量瓶中，同上述操作步驟顯色和測定，該標(biāo)準(zhǔn)系列P 的濃度分別為0、1.0、2.5、5.0、7.5、10.0、15.0pg*mL~1。

?結(jié)果計算