B細胞的分化過程主要可分為前B細胞（Pre-B cell）、不成熟B細胞(immature B cell)、成熟B細胞(mature B cell)、活化B細胞(activated B cell)和漿細胞(plasma cell)五個階段。

?

B細胞分化的各個階段可以通過評估不同的細胞表面標志物的表達和水平來確定，這些標志物的表達和水平在B細胞分化的整個過程中都受到調(diào)節(jié)。前B細胞胞漿中可檢測到IgM的重鏈u鏈，但無輕鏈，也無膜表面Ig的表達，因此缺乏對抗原的反應(yīng)能力。末端脫氧核甘酸轉(zhuǎn)移酶（terminal deoxy nucleotidyl transferase TdT）以及CD10可表達在前B細胞，進入非成熟B細胞后這兩種標志即消失，因此TdT和CD10對于區(qū)分前B細胞與B細胞其它發(fā)育階段非常有用。CD19、CD20和MHCI類抗原在此階段開始表達。

?

前B細胞對抗原無應(yīng)答能力；不成熟B細胞開始表達mIgM，但如與抗原結(jié)合，則產(chǎn)生負應(yīng)答，使B細胞轉(zhuǎn)變?yōu)槭芤种茽顟B(tài)，不能繼續(xù)分化為成熟的B細胞，這是形成自身免疫耐受的機制之一，CD19、CD20和MHCI類抗原表達量增加，并可開始表達CD21抗原；骨髓中發(fā)育成熟B細胞經(jīng)血液遷移至外周淋巴器官，此時膜表面同時表達mIgM和mIgD，mIgD的表達防止了B細胞與抗原結(jié)合后所引起的免疫耐受；成熟B細胞接受抗原刺激后，在抗原提呈細胞和Th細胞的輔助下成為活化B細胞，進而分化為漿細胞，合成和分泌各類免疫球蛋白，同時獲得了PC-1等漿細胞特異性標志，而mIg，MHCI類抗原、CD19、CD20、CD21等標記消失。

?

由此可知，B細胞及其分化亞群可以根據(jù)細胞表面表達的不同標志物而區(qū)分。選擇這些結(jié)合了熒光的抗體直接標記這些標志物之后，就可以通過多色流式分析技術(shù)實現(xiàn)對抗體分泌B細胞的篩選。

?

EXBIO分泌抗體B細胞篩選試劑盒，基于不同熒光標記的抗體CD45/IgD/CD27/CD24/CD19/CD21/CD38對EDTA抗凝人血中的抗體分泌B細胞亞群進行免疫表型分析。

結(jié)果分析：

需要住院的COVID-19患者中免疫細胞頻率動力學的事例。

?

上圖設(shè)門分析顯示了用于鑒定患者外周全血中抗體分泌細胞（ASC）亞群；下圖顯示了患者住院期間幾個時間點測得的細胞頻率（占B細胞的百分比）。

流式細胞術(shù)表型鑒定正常人外周血全血中的抗體分泌細胞（ASC）的策略：

?

1.單重態(tài)細胞

2.白細胞

3.單核細胞

4.CD19 + B淋巴細胞

5.CD19 + CD27 +記憶B淋巴細胞

6.CD19 + CD27 + CD38 +抗體分泌細胞

7.IgD +非轉(zhuǎn)換和IgD-級轉(zhuǎn)換的成漿細胞

使用ED7704?抗體分泌B細胞篩選試劑盒在正常人外周血中對循環(huán)的抗體分泌細胞（CD19 + CD27 + CD38 +漿母細胞）進行流式細胞儀表面染色。

顯示了每個目標人群的頻率（B細胞的百分比）。

?

文章來源：多色流式細胞術(shù)如何篩選抗體分泌B細胞

https://www.amyjet.com/featured/dryflowex-asc-screen.shtml