自上而下、自中而下和自下而上分析法比較
自下而上蛋白質(zhì)組學(xué)策略是一種將蛋白質(zhì)/酶的大片段混合物分解成小片段肽以進(jìn)行分析的傳統(tǒng)蛋白質(zhì)組學(xué)分析策略。廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)組學(xué)研究的質(zhì)譜技術(shù)。
自中而下蛋白質(zhì)組學(xué)策略使用不同的酶來獲得較長的肽。它可以分析和識別較長的肽鏈上同時發(fā)生的幾種翻譯后修飾。與自下而上的方法相比,它可以分析的肽的長度范圍更大。
自上而下的蛋白質(zhì)組學(xué)策略不需要酶水解的過程,而是直接分析完整的蛋白質(zhì)。該技術(shù)可以提供更準(zhǔn)確和更豐富的完整蛋白質(zhì)的生物學(xué)信息。
自下而上
1. 將蛋白質(zhì)水解成肽段;
2. 成熟的蛋白質(zhì)定量方法;
3. 通量更高;
4. 自然信息丟失導(dǎo)致無法識別蛋白質(zhì)變異;
5. 無法正確分析PTMs之間的關(guān)系。
自中而下
1. 該法針對通過有限的蛋白質(zhì)酶解產(chǎn)生的分子量為5-20kDa的多肽;
2. 可分析并鑒定較長多肽鏈上同時存在的幾種翻譯后修飾。與自下而上法相比,該法可分析更長的肽段。;
3. 組蛋白翻譯后修飾鑒定。
自上而下
1. 無需化學(xué)消化或酶水解;
2. 100%序列覆蓋率,可獲得蛋白質(zhì)的完整形態(tài)特征;
3. 整個蛋白質(zhì)通過質(zhì)譜分析,可獲得最佳PTM特征;
4. 通量較低。
標(biāo)簽:蛋白質(zhì)組學(xué)