293T [HEK-293T](人胚腎細(xì)胞)是293 [HEK-293]細(xì)胞株插入了SV40 T-antigen的溫度敏感基因形成的高轉(zhuǎn)衍生株。該細(xì)胞廣泛應(yīng)用于病毒包裝，因其比較容易轉(zhuǎn)染，也是常用的表達(dá)研究外源基因的細(xì)胞株。

該細(xì)胞因?yàn)橘N壁松散，若購(gòu)買(mǎi)常溫細(xì)胞，收貨時(shí)有可能大部分細(xì)胞脫離培養(yǎng)瓶壁，顯微鏡下找不到細(xì)胞，只能看到肉眼可見(jiàn)的細(xì)胞團(tuán)，是正?，F(xiàn)象（如圖2）。

參照以下方式處理即可恢復(fù)正常：

1

收到細(xì)胞后請(qǐng)先置于培養(yǎng)箱中穩(wěn)定2 ~ 4h后再進(jìn)行下一步處理，不建議放置培養(yǎng)箱過(guò)夜后處理；

2

將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無(wú)菌離心管，1200rpm離心3min收集細(xì)胞；

3

去掉上清，用PBS重懸細(xì)胞（以手搖離心管的方式重懸，不要用移液槍吹），將細(xì)胞收集到一個(gè)離心管中，再次1200rpm離心3min；

4

去掉上清，加入1mL左右0.25%胰酶重懸細(xì)胞（還是以手搖離心管的方式混勻，不要吹細(xì)胞）, 放入培養(yǎng)箱消化2min；

5

消化2min后，加入5mL完全培養(yǎng)基混勻終止消化，用移液槍輕輕吹打細(xì)胞懸液，使細(xì)胞團(tuán)分散，1200rpm離心3min；

6

去掉上清，加入6mL左右細(xì)胞相應(yīng)的完全培養(yǎng)基混勻，視細(xì)胞量決定是1:2傳代還是1:3傳代（由于細(xì)胞運(yùn)輸有損傷，首次傳代建議比平時(shí)養(yǎng)密度稍高）；

7

顯微鏡下觀察細(xì)胞是否有分散成單顆現(xiàn)象，若有明顯很大的細(xì)胞團(tuán)需要重復(fù)上述步驟二次消化；

8

第二天及時(shí)觀察細(xì)胞貼壁情況，若貼壁細(xì)胞量過(guò)多，造成細(xì)胞堆積，貼壁24h后再次傳代分瓶，若密度正常則繼續(xù)生長(zhǎng)，不建議換液，貼壁48h后換液去掉不能貼壁的細(xì)胞。

培養(yǎng)注意事項(xiàng)

細(xì)胞貼壁松散，操作時(shí)應(yīng)輕拿輕放；

培養(yǎng)時(shí)可將培養(yǎng)瓶/皿進(jìn)行包被；

PBS潤(rùn)洗時(shí)動(dòng)作應(yīng)緩慢，避免沖走細(xì)胞；

細(xì)胞傳代第二天可能有輕微聚團(tuán)現(xiàn)象，再長(zhǎng)一天能長(zhǎng)開(kāi)，不建議傳代第二天換液，以免損失細(xì)胞。