關鍵詞：支原體感染?? CAR-T細胞培養(yǎng)室消毒? CAR-T細胞房消毒??

? ? ? ?CAR-T，全稱是Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy，嵌合抗原受體T細胞免疫療法。這是一個出現(xiàn)了很多年，但是近幾年才被改良使用到臨床上的新型細胞療法。在急性白血病和非霍奇金淋巴瘤的治療上有著顯著的療效，被認為是很有前景的腫瘤治療方式之一。

? ? ? 嵌合抗原受體T細胞在培養(yǎng)操作過程中，遇到的較為常見的問題是：支原體感染。 如何解決支原體感染的問題？如何有效預防支原體感染？是每個生物企業(yè)需要不同程度重視的問題。

? ? ? ?細胞培養(yǎng)的環(huán)境要求都是無菌的，然而在細胞培養(yǎng)的過程中也難免會感染，特別是支原體的感染。細胞培養(yǎng)（特別是傳代細胞）被支原體污染是個世界性問題。國內(nèi)外研究表明，95％以上是以下四種支原體：口腔支原體（M.orale）、精氨酸支原體（M.arginini）、豬鼻支原體（M.hyorhinis）和萊氏無膽甾原體（A.laidlawii），為牛源性。以上是常見的污染細胞培養(yǎng)的支原體菌群，但能夠污染細胞的支原體種類是很多的，國外調(diào)查證明，大約有二十多種支原體能污染細胞，有的細胞株可以同時污染兩種以上的支原體。

? ? ? ?支原體是目前已知一類能在無生命培養(yǎng)基上生長繁殖的最小的原核細胞微生物，在自然界分布廣泛，無細胞壁，直徑為0.1-0.3μm，且形態(tài)易變，極易通過除菌過濾器。大部分支原體繁殖速度比細菌慢，細胞培養(yǎng)過程中遇到的支原體95%都來自于以下四種支原體：口腔支原體、精氨酸支原體、豬鼻支原體、萊氏無膽甾支原體，其中萊氏無膽甾支原體為牛源性。

?二．支原體的污染來源

（1）細胞之間交叉污染；

（2）細胞培養(yǎng)操作人員的口腔、皮膚等；

（3）工作環(huán)境或實驗器材的污染；

（4）培養(yǎng)基的污染。

?三．支原體污染的嚴重性

（1）細胞外形可以沒有明顯的變化，支原體可以與細胞共存，污染后細胞液不會死亡，培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁；

（2）使用被支原體污染的細胞做實驗會嚴重影響實驗的結果，因為支原體會抑制細胞生長；導致染色體畸變；細胞膜抗原性改變；細胞復蘇后存活率降低等。

?（3）影響細胞的代謝和功能：培液中的精氨酸被支原體大量消耗，引起細胞蛋白質(zhì)、DNA、rRNA、mRNA的合成障礙；支原體活動使培液成分發(fā)生改變（如發(fā)酵型支原體降解糖類產(chǎn)生酸性物質(zhì)），影響細胞代謝。

（4）培養(yǎng)過程中細胞破碎較多，培養(yǎng)基pH變化明顯，需要頻繁更換新鮮培養(yǎng)基；

（5）細胞被支原體污染后會形成共生體系導致污染不斷擴大。

? ? ? ? 細胞培養(yǎng)室的環(huán)境消毒在整個細胞培養(yǎng)過程中至關重要，在細胞組織培養(yǎng)過程中，離體細胞對任何毒性物質(zhì)都十分敏感。毒性物質(zhì)包括解體的微生物及細胞殘余物以及非營養(yǎng)的化學物質(zhì)，因此對培養(yǎng)室的環(huán)境和工具消毒十分重要。

? ? ??微生物污染的最大難題是：看不到。需要企業(yè)慎之又慎的進行環(huán)境消毒工作，在付出態(tài)度的同時，可以結合新技術協(xié)助進行： 歐菲姆OXY－30000型 實驗室（細胞房）專用環(huán)境消毒滅菌方案，通過對支原體污染的多年研究，總結了一套行之有效的，操作簡便的消毒方案，是眾多生物科技企業(yè)的穩(wěn)定消毒滅菌選擇。

? ? ? ? 控制環(huán)境污染：可以使用諾福支原體清除噴霧進行空間消毒，干霧滅菌方案構成:諾福支原體清除劑 + 比林科漢過氧化氫滅菌設備。

??? ???比林科漢過氧化氫環(huán)境消毒設備，能夠制造出肉眼看不到的干霧顆粒，可以無孔不入的滲透的生物安全柜，操作臺，和各種設備的死角，能夠起到甲醛一樣的殺菌作用，但是絕對安全且作用迅速：
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2、接近氣體的覆蓋可以保證將隱藏在各處的支原體污染源根除。
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4?、輕巧，便攜，可以廣泛應用任何需要消毒的潔凈場所。
5、符合CNAS要求，國內(nèi)權威檢測機構，歐盟Eurofin實驗室檢測報告。

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