Calcein AM染色原理

Calcein AM是一種可對活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的細(xì)胞染色試劑，由于它在Calcein的基礎(chǔ)上加強(qiáng)了疏水性，因此能夠輕易穿透活細(xì)胞膜。當(dāng)其進(jìn)入到細(xì)胞質(zhì)后，酯酶會將其水解為Calcein留在細(xì)胞內(nèi)，發(fā)出強(qiáng)綠色熒光。與其它同類試劑 (如BCECF-AM和Carboxy-fluorescein diacetate) 相比，Calcein-AM是最適合作為熒光探針去染活細(xì)胞的，因?yàn)樗募?xì)胞毒性很低。Calcein不會抑制任何的細(xì)胞功能如增殖或淋巴球的趨化性。使用了Calcein的活性檢測的實(shí)驗(yàn)結(jié)果是十分可信并且與標(biāo)準(zhǔn)的51Cr-釋放法所得結(jié)果相一致的。Calcein的激發(fā)和發(fā)射波長分別為490nm和515nm。? ? ?

Calcein AM結(jié)構(gòu)式

Calcein-AM可與PI結(jié)合使用，分別對活細(xì)胞和死細(xì)胞染色，可用于同時(shí)對活細(xì)胞和死細(xì)胞進(jìn)行熒光染色。? ? ?

Calcein AM使用方法

1. 用 DMSO 制備1mM?的 Calcein, AM溶液后，再采用 PBS 將其稀釋制成為 1～50 μM 的Calcein, AM溶液。
2. 其次再將 1/10的細(xì)胞培養(yǎng)基體積的 Calcein, AM溶液 加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中。
3. 在37℃恒溫條件下，培養(yǎng)細(xì)胞約 15～30分鐘。
4. 采用 PBS 或 適當(dāng)?shù)木彌_液洗滌細(xì)胞兩次。
5. 使用490nm激發(fā)波長，515 nm發(fā)射波長濾光片的熒光顯微鏡進(jìn)行觀察細(xì)胞。
? ? ? ※ 如果 Calcein, AM 很難進(jìn)入細(xì)胞，可以使用表面活性劑，例如：Pluronic F127。
? ? ? ※ 也可以用 1/10濃度的Calcein, AM溶液 代替培養(yǎng)基。

在不同基質(zhì)上培養(yǎng) 3 天后，鈣黃綠素-AM（綠色）和碘化丙啶（紅色和黃色）染色的肝細(xì)胞的共聚焦激光掃描顯微鏡（CLSM）圖像。

Calcein AM光譜