一、百螢ReadiLink生物素 缺口平移 dsDNA標(biāo)記試劑盒概述 ReadiLink 生物素 缺口平移 dsDNA 標(biāo)記試劑盒提供了一種簡單有效的方法，可以使用明亮且光穩(wěn)定的 生物素染料標(biāo)記雙鏈 DNA 樣本。標(biāo)記試劑盒為 DNA 標(biāo)記所需的完整工作流程提供了所有必要的試劑。該方法使用 DNAse 和 DNA 聚合酶的組合來切割 DNA 螺旋的一條鏈，生物素染料與之結(jié)合。此外，該試劑盒允許用戶通過調(diào)整 生物素-dUTP 偶聯(lián)物與 dTTP 的比例來優(yōu)化摻入和產(chǎn)品大小。它與多種樣品材料兼容，包括人工染色體 (BAC) DNA、人類基因組 DNA、純化的 PCR 產(chǎn)物、超螺旋和線性化質(zhì)粒 DNA。得到的 生物素標(biāo)記 DNA 可用于多種分子生物學(xué)技術(shù)，例如熒光原位雜交 (FISH)。 ? 二、百螢ReadiLink生物素 缺口平移 dsDNA標(biāo)記試劑盒實(shí)驗(yàn)方案 ?

簡要概述

1.?準(zhǔn)備 DNA 樣本

2.?向試管中加入試劑

3.?短暫混合并離心

4.?在 15°C 下孵育 60 分鐘

5.?將反應(yīng)置于冰上，然后加入停止溶液并在 65°C 下加熱

6.?使用前在冰上放置 5 分鐘或在 4°C 下儲存

7.?純化標(biāo)記的 DNA

?注：在開始實(shí)驗(yàn)之前，解凍所有成分。在開始標(biāo)記過程之前，將所有試劑短暫渦旋至底部。 ?實(shí)驗(yàn)步驟 表1.各反應(yīng)每管試劑組成

可以優(yōu)化生物素-dUTP（組分 A）：dTTP（組分 E）的比例以獲得佳標(biāo)記條件。 可以優(yōu)化孵育時(shí)間以獲得更好的標(biāo)記。 更長的孵育時(shí)間將有助于更多的標(biāo)記，但可能會縮短終產(chǎn)品的尺寸。 1.向干凈的（無核酸酶）0.5 mL 微型離心管或 0.2 mL PCR 管中，按表 1 中所示的順序添加試劑。 2.通過短暫的渦旋和短暫的離心小心混合試劑。 3.將反應(yīng)在 15°C 下孵育 60 分鐘。 4.孵育后，將反應(yīng)置于冰上。 5.要終止反應(yīng)，請?zhí)砑?5 μL 停止溶液并將樣品加熱至 65 °C。 6.使用前在冰上放置 5 分鐘或在 4°C 下儲存。 7.純化標(biāo)記的 DNA。