重組抗體高效表達(dá)秘籍
抗體藥物的發(fā)展經(jīng)歷了鼠源單克隆抗體、人-鼠嵌合抗體、人源化抗體和全人抗體等階段，在抗腫瘤、抗自身免疫疾病、抗感染及生物傳感器等領(lǐng)域都具有較好的應(yīng)用前景。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，利用基因工程重組抗體蛋白、構(gòu)建抗體藥物偶聯(lián)物及哺乳動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)等生產(chǎn)技術(shù)推動(dòng)抗體工程進(jìn)入了一個(gè)全新的時(shí)代。
重組抗體又叫基因工程抗體，是利用DNA和蛋白質(zhì)工程技術(shù)，在基因水平上對(duì)免疫球蛋白分子進(jìn)行適當(dāng)加工改造，重新裝配導(dǎo)入受體細(xì)胞后表達(dá)出來(lái)的抗體分子。與傳統(tǒng)的單克隆抗體和多克隆抗體相比，重組抗體具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，現(xiàn)已被廣泛地應(yīng)用在科學(xué)研究、免疫診斷及治療性抗體領(lǐng)域。
重組抗體優(yōu)勢(shì)
周期短：重組抗體在數(shù)周即可生產(chǎn)，而雜交瘤抗體制備需要數(shù)月；
一致性高、重復(fù)性好：重組抗體的基因是確定的，抗體生產(chǎn)是可控且可靠的，使得抗體的批次間差異小，重復(fù)性好；
靈敏度和特異性高：基因工程改造，利用重組技術(shù)選擇的抗體更優(yōu)質(zhì)；
免疫原性低：無(wú)需免疫和篩選；
大規(guī)模抗體制備：可實(shí)現(xiàn)無(wú)動(dòng)物體外生產(chǎn)。
重組抗體的表達(dá)須遵循兩個(gè)基本原則：
1. 保持抗體親和力和特異性，尤其不能喪失抗體特異結(jié)合抗原的能力；
2. 應(yīng)當(dāng)降低或消除抗體的免疫原性。
我們
做到了
普健生物自有的哺乳表達(dá)系統(tǒng)高產(chǎn)量pATX系列載體及馴化293系列和CHO系列細(xì)胞，能實(shí)現(xiàn)全長(zhǎng)抗體以及多種形式的重組抗體片段的高效分泌表達(dá)；無(wú)需免疫和篩選，直接利用抗體基因序列即可實(shí)現(xiàn)重組抗體的高產(chǎn)和可重復(fù)生產(chǎn)。
重組抗體在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的高效表達(dá)有賴于高效表達(dá)載體的構(gòu)建、抗體基因序列的優(yōu)化、抗體穩(wěn)定細(xì)胞株的篩選、表達(dá)宿主細(xì)胞的改造及細(xì)胞培養(yǎng)工藝的優(yōu)化等。這些問(wèn)題我們都可以完美解決。
服務(wù)內(nèi)容
1.?單克隆抗體測(cè)序：
提供雜交瘤細(xì)胞單克隆抗體的測(cè)序，周期短，實(shí)現(xiàn)重鏈輕鏈基因全面分析。
2.?質(zhì)粒構(gòu)建：
經(jīng)密碼子優(yōu)化及基因合成，采用公司自有的哺乳表達(dá)系統(tǒng)pATX系列載體，優(yōu)化實(shí)現(xiàn)高產(chǎn)量表達(dá)。
3.?抗體表達(dá)及純化：
馴化成熟的293系列和自主產(chǎn)權(quán)的CHO-K1細(xì)胞系，實(shí)現(xiàn)抗體高效表達(dá)純化。
4.?穩(wěn)定細(xì)胞株：
成熟的穩(wěn)定細(xì)胞株篩選平臺(tái)，產(chǎn)量可優(yōu)化到克級(jí)；長(zhǎng)期穩(wěn)定傳代表達(dá)，抗體質(zhì)量穩(wěn)定。
普健優(yōu)勢(shì)
1.?抗體藥物研發(fā)專(zhuān)家和技術(shù)團(tuán)隊(duì)，提供個(gè)性化抗體發(fā)現(xiàn)整體方案，重組抗體表達(dá)量高，采用高密度轉(zhuǎn)染，可實(shí)現(xiàn)瞬轉(zhuǎn)表達(dá)量幾百毫克每升，穩(wěn)轉(zhuǎn)可優(yōu)化到克級(jí)。
2.?抗體表達(dá)經(jīng)驗(yàn)豐富，已成功表達(dá)過(guò)多種形式的全長(zhǎng)抗體（Human IgG1~4，Mouse IgG2b，Mouse IgG2a，Rabbit IgG等）和抗體片段（scFv，F(xiàn)ab，tandem-scfv，VHH，F(xiàn)c融合蛋白，bi-specific antibody等）。
3.?一站式服務(wù)：擁有多種服務(wù)平臺(tái)，在實(shí)現(xiàn)重組抗體設(shè)計(jì)表達(dá)和純化的同時(shí)，進(jìn)行抗體質(zhì)控和活性驗(yàn)證，并由經(jīng)驗(yàn)豐富的專(zhuān)家根據(jù)客戶需求進(jìn)行人源化設(shè)計(jì)驗(yàn)證。
4.?自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的GS敲除系統(tǒng)細(xì)胞系，長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)，抗體質(zhì)量更穩(wěn)定。
5. 周期短，可提供2~3周急速交付重組抗體表達(dá)服務(wù)。
普健生物AtaRATM保證型重組抗體表達(dá)服務(wù)
客戶提供
抗體需求量
純度/內(nèi)毒素/proteinA/G殘留檢測(cè)
項(xiàng)目周期
交付內(nèi)容
抗體序列
1~5mg
>95% by SDS-PAGE or HPLC
Endotoxin<1EU/mg
Concentration>1mg/L
6~8周
基因合成的質(zhì)粒
重組抗體
重組抗體表達(dá)報(bào)告
5mg~500mg
500mg~1g
案例展示
Expression caseⅠ: scFv
Expression system：B.subtilis Expression System
Figure 1.1 Target scFv?purification profile.
Figure 1.2 Final sample QC.?
Conclusion:Total obtained 37mg?scFv from 1L scale up purification,?purity>90%.
Expression case?Ⅱ: Bi-specific Antibody
Expression System：Mammalian 293F?Expression System
?Figure 2.1 Target protein purification profile.?
?Figure?2.2 Final?sample QC.
Conclusion:?Bi-specific antibody A total obtained 17.35mg per liter of culture, purity> 90%.?Bi-specific antibody B total obtained 16.23mg?per liter of culture,?purity>?85%.
Expression case?Ⅲ: IgG-like bi-specific antibody
Expression System：Mammalian CHO-S Expression System
Figure 3.1 Target protein purification profile.?
?Figure 3.2 Final?sample QC.
Conclusion:?Total obtained IgG-like:?104mg?from 1L scale up purification, purity> 90%.
Expression case?Ⅳ: IgG (Human)
Expression System：Mammalian 293F Expression System
Figure 4.1 Target protein purification profile.?
?Figure 4.2 Final?sample QC.
Conclusion:?Total obtained IgG:?80mg?from 1L scale up purification, purity> 90%.
Expression case?Ⅴ: IgG2a (mouse)
Expression System：Mammalian CHO-S Expression System
Figure 5.1 Target protein purification profile.
Figure 5.2 Final?sample QC.
