Rosetta-gamiB(DE3)感受態(tài)細胞

產(chǎn)品編號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

MCC0091

Rosetta-gami B(DE3)感受態(tài)細胞

100μl*10

保存條件：-80℃。

1.產(chǎn)品簡介：

本產(chǎn)品是采用大腸桿菌Rosetta-gami B(DE3)感受態(tài)細胞菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞。Rosetta-gami B(DE3)?菌株聚合了BL21，Tuner，Origami和Rosetta四種菌株的優(yōu)點。

基因型：F- ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB pRARE (Camr, Kanr, Tetr)

特點：1．來源于Origami B系列菌株，是集合了BL21系列，Rosetta系列菌株和Origami系列菌株的優(yōu)點，極大的增強了細胞內(nèi)二硫鍵的形成和含有在大腸桿菌中稀有密碼子的真核細胞蛋白的表達能力。2．lacY1基因?(半乳糖苷透性酶基因)突變賦予其，IPTG以均一速度進入體系中大腸桿菌的每個細胞，產(chǎn)生更加嚴格、均一的濃度依賴。3．pRARE補充大腸桿菌缺乏的6?種稀有密碼子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA)對應(yīng)的tRNA，提高外源基因的表達水平。4．突變的硫氧還蛋白還原酶(trxB)和谷胱甘肽還原酶?(gor)基因，它們是還原途徑的兩個關(guān)鍵酶，其突變有利于高效形成正確折疊的含有二硫鍵的蛋白，增強蛋白的可溶性。5．該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū)，含有T7噬菌體RNA聚合酶，適合T7啟動子誘導(dǎo)的蛋白表達，及其他T7啟動子系列載體。Rosetta-gamiB(DE3)菌株具有卡那霉素，氯霉素，四環(huán)素抗性。pUC19質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率可達108cfu/μg DNA。

2.使用說明：

1．取100 μl感受態(tài)細胞置于冰浴中融化。

2．待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態(tài)細胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30min。
3．42℃熱擊45sec，然后快速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3min，該過程不要搖動離心管。
4．每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，?150 rpm振蕩培養(yǎng)45～60m使菌體復(fù)蘇。
5．根據(jù)實驗需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細胞，加到含相應(yīng)抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，?37℃培養(yǎng)12~16h。

3.注意事項：

1．剛化凍的細胞轉(zhuǎn)化效率最高，避免反復(fù)化凍。

2．轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌量。

3．誘導(dǎo)時，IPTG濃度可選（0.1-2 mM均可）。

4．獲得需要量的蛋白，最佳誘導(dǎo)時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。

*本試劑僅供實驗室研究使用