小鼠單抗Ig類/亞類鑒定用ELISA試劑盒

產(chǎn)品編號：FRD90100K8

試劑原理：

本試劑盒利用雙抗體夾心法鑒定小鼠淋巴細胞雜交瘤培養(yǎng)上清中單克隆抗體或特異親和純化的單克隆抗體的類和亞類（可區(qū)分出IgG1\IgG2a\IgG2b\IgG3\IgM\IgA、Kappa\Lambda）。采用小鼠抗體共有位點的二抗包被微孔板，與加入的培養(yǎng)上清中的小鼠抗體結(jié)合，再加入HRP標記的抗小鼠各類、亞類的抗體來分別反應(yīng)，最后用TMB底物系統(tǒng)顯色并用稀硫酸終止，再通過酶標儀檢測吸光度來判斷被測單克隆抗體的類或亞類。亦可通過肉眼觀察顏色深淺直接判斷結(jié)果。

產(chǎn)品特點：

高靈敏度、高特異性、無交叉反應(yīng)，檢測樣品范圍廣泛結(jié)果容易判定。

保存條件：

試劑盒未開啟2-8℃避光保存效期一年。不正確存放或過于頻繁開啟使用有可能因此使效期縮短。

組成成分：

組分名稱

組分規(guī)格

?組分數(shù)量

包被抗小鼠抗體共位點酶標板???

12T

2塊

亞型抗體酶標二抗（即用型）??????? ?

2ml/瓶*2

16瓶

?陽性對照(+)

1.8ml

1管

?陰性對照(-)

1.8ml

1管

通用稀釋液

30ml

2瓶

單組份TMB底物液

25ml

1瓶

TMB底物終止液

15ml

1瓶

?25×濃縮洗滌液

30mL

2瓶

?封板膜

5張

產(chǎn)品說明書

1份

使用范圍：

用于鑒定細胞上清及腹水中小鼠單克隆抗體Ig類、亞類\亞型的鑒定以及相關(guān)內(nèi)容的研究。

使用方法：

使用方法：

1、將ELISA試劑盒各組分恢復(fù)室溫（大約30min），同時用純水將25×濃縮洗滌液配成工作液（每份濃縮洗滌液加24份純水）。

2、取出酶標板；扣取適量酶標板條，每個標本需要8孔，陽性對照8孔，陰性對照8孔。多余的用自封袋保存，記得放入干燥劑。

3、將標本檢測孔每孔先加入標本稀釋液各50μl。然后將50μl細胞培養(yǎng)上清（或特異親和純化的抗體）再加入酶標微孔板，每個標本加8孔；陽性對照和陰性對照孔不加標本稀釋液，各加8孔每孔100μl。貼上封板膜37℃溫育30分鐘。

4、反應(yīng)完畢后棄去板內(nèi)液體，洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干或機洗5遍。再在每個標本的8孔中分別加入8種酶標二抗各100μl，通用陽性、陰性對照的各孔也一樣。在加樣圖上或酶標板上做好標記。貼上封板膜37℃溫育30分鐘。

5、吸棄板內(nèi)液體，洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干或機洗5遍。每孔分別加入單組份TMB底物液100μl，封板膜貼板避光37℃顯色20分鐘。

6、本試劑盒特異性好，可肉眼觀察顯色結(jié)果，確定顯色孔所對應(yīng)的酶標二抗判斷此標本的Ig類或亞類。也可將反應(yīng)終止液（每孔50μl）終止反應(yīng)后用酶標儀450nm測定波長，630nm參考波長雙波長測定結(jié)果，參看高值孔所對應(yīng)的酶標二抗判定此標本的Ig類或亞類(陽性對照OD一般不小于0.8，陰性對照一般不高于0.15，陽性判定標準：樣品OD大于陰性O(shè)D+0.15，陰性O(shè)D低于0.05按0.05算)。

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注：單抗屬于雜交瘤融合得來，存在一定比例的變異，另外，如果待檢樣品濃度太高也容易造成背景偏高，原則上以高值孔對應(yīng)的亞類為準！

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注意事項：

1.???本試劑盒實際壽命遠比標示的有效期更長，超過有效期后可能仍可使用，但是不建議您使用，請您在有效期內(nèi)使用；超過有效期使用產(chǎn)品產(chǎn)生的問題不在售后范疇。

2.???由于腹水成分十分復(fù)雜，本試劑盒不建議用于腹水檢測，如果需要檢測腹水，請購買本公司其他試劑盒；如果確實需要用本試劑盒檢測腹水亞型，建議將腹水稀釋1-5萬倍，同時使用自包被的抗原板子替代本試劑盒中的酶標板，此種情況下本試劑盒中的陽性對照可能不能正常工作。

3.???手工洗板時，洗液要加滿板孔，浸泡10秒然后棄盡，最后要拍干凈。加入的酶標二抗溫育后，要把酶標液吸凈，不要直接甩出，這個在手工洗板時對結(jié)果很重要。

4.???一次沒用完的板子要帶干燥劑放自封袋封好，隨盒存放。

5.???拿放加樣后的板子不要劇烈抖動，以免孔間交叉污染出現(xiàn)錯誤結(jié)果。

6.???本試劑一般不會出現(xiàn)兩個陽性，但出現(xiàn)兩個陽性的現(xiàn)象現(xiàn)實中是真實存在的，一般會取高OD值判為陽性，出現(xiàn)這種情況有多重原因：1）培養(yǎng)的細胞中有“飼養(yǎng)細胞”殘留；2）由于單抗研制存在人工干預(yù)步驟因此抗體本身有可能會存在亞類結(jié)構(gòu)上的輕微變異； 3）樣品為非特異親和純化的抗體或樣品是腹水，4）上清出現(xiàn)少量污染；5）實驗操作粗放；6）加錯試劑；7）樣品中抗體濃度太高。

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特別提示：

不具備ELISA基礎(chǔ)知識和操作的人員不要完成此實驗或類似實驗，因為這可能會給您帶來錯誤的結(jié)果和不必要的損失。

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*本試劑僅供實驗室研究使用