脊椎動物的凝血系統(tǒng)對于維持自身封閉的高壓循環(huán)系統(tǒng)是至關(guān)重要的。血管損傷時，需要凝血因子激活才能有效的止血。原發(fā)性止血是由血管損傷部位的血小板的聚集和激活引起的。在繼發(fā)性止血過程中，凝血因子的激活通過不溶性纖維蛋白網(wǎng)絡(luò)的沉積來增強(qiáng)血小板堵塞。然而，凝血功能的異常激活可導(dǎo)致血管內(nèi)血凝塊的形成，從而形成病理血栓性疾病，如心肌梗死、中風(fēng)和靜脈血栓栓塞等。

血管內(nèi)皮的損傷，是血栓形成的最重要和最常見的原因。 內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，暴露了內(nèi)皮下的膠原纖維，激活血小板和凝血因子Ⅻ，啟動了內(nèi)源性凝血系統(tǒng)。損傷的內(nèi)皮細(xì)胞釋放組織因子，激活凝血因子Ⅶ，啟動外源性凝血系統(tǒng)。在觸發(fā)凝血過程中起重要作用的是血小板的活化。血小板粘集，血小板與纖維蛋白和纖維連接蛋白粘附，促使血小板彼此粘集成堆。

模型建立：

實驗選用雄性、250-300gSD大鼠，通過血管外敷氯化亞鐵（FeCl2）溶液構(gòu)建動物血栓模型，并檢測陽性藥肝素鈉對動物血栓模型的影響。

模型組使用FeCl2溶液在股動脈上外敷20min，血管局部應(yīng)用FeCl2溶液后，鐵離子通過胞吞胞吐途徑進(jìn)入血管腔，由于高價鐵離子的氧化作用導(dǎo)致內(nèi)皮損傷，引起血小板激活、黏附、集聚，進(jìn)而形成血栓。

陽性對照組使用FeCl2+肝素鈉，先在頸部區(qū)域皮下注射800U/kg肝素鈉溶液，30min后，再用FeCl2溶液在股動脈上外敷20min。肝素鈉能干擾血凝過程的許多環(huán)節(jié)，在體內(nèi)外都有抗凝血作用。其作用機(jī)制比較復(fù)雜，主要通過與抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）結(jié)合，而增強(qiáng)后者對活化的Ⅱ、Ⅸ、X、Ⅺ和Ⅻ凝血因子的抑制作用，其后果涉及阻止血小板凝集和破壞、妨礙凝血激活酶的形成、阻止凝血酶原變?yōu)槟?，抑制凝血酶，從而妨礙纖維蛋白原變成纖維蛋白，從而發(fā)揮抗凝作用。

檢測指標(biāo)：

檢測動物血清中IL-1β、TNF-α含量、股動脈病理學(xué)HE染色、血栓大小測量、Western Blot(Hif-1α)、紅外血流監(jiān)測。

檢測結(jié)果：

l?股動脈病理學(xué)HE染色結(jié)果：D3、D7時，與Sham組相比，Model組大鼠股動脈的血管腔內(nèi)血流停滯，停滯的血液凝固充滿血管腔，形成明顯血栓且因血栓的產(chǎn)生使血管壁變??；在D31時，與Sham組相比，Model組大鼠股動脈內(nèi)的血栓發(fā)生軟化、溶解，大部分血栓被肉芽組織取代；在D3、D7和D31時，與Sham組相比，肝素鈉組大鼠股動脈，血管內(nèi)膜粗糙，血小板粘集成堆，使局部血流形成漩渦。

l 小鼠血清中IL-1β的含量：在D3、D7和D31時，與Model組相比，Sham組與肝素鈉組血清中IL-1β的含量明顯降低，有極顯著差異；在D31時，與Model組相比，Sham組與肝素鈉組血清中IL-1β的含量降低，差異顯著。

l 小鼠血清中TNF-α的含量：在D3、D7和D31時，與Model組相比，Sham組與肝素鈉組血清中TNF-α的含量明顯降低，有極顯著差異；在D31時，與Model組相比，Sham組與肝素鈉組血清中TNF-α的含量降低，差異顯著。

l?Western Blot結(jié)果：在D7、D31時，與Model組相比，Sham組Hif-1α的含量明顯降低，有極顯著差異，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001）；與Model組相比，肝素鈉組Hif-1α的含量有所降低，有顯著性差異，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。

l 血栓大小測量：Sham組血栓直徑明顯小于Model組，有顯著性差異，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；肝素鈉組血栓直徑小于Model組，有統(tǒng)計學(xué)差異，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

l 紅外血流監(jiān)測：Sham組血流信號豐富，血管管壁清晰，血流通暢，未有血栓形成；Model組造模處未見血流形成，血管壁粘連；肝素鈉組造模處較Model組血流量有所恢復(fù)，可見少量血流通過。

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